[发明专利]环二核苷酸修饰铝纳米粒疫苗佐剂-传递系统及基于其的SARS-CoV-2亚单位疫苗

说明书

本发明属于生物制剂领域，公开了环二核苷酸修饰的铝纳米粒疫苗佐剂‑传递系统及基于该疫苗佐剂‑传递系统的SARS‑CoV‑2亚单位疫苗。CAN以铝纳米粒为载体，在铝纳米粒表面有环二核苷酸分子修饰。本发明以SARS‑CoV‑2刺突蛋白受体结合域(SCV2‑RBD)作为抗原，以环二核苷酸修饰铝纳米粒为疫苗佐剂‑传递系统(VADS)，构建了SARS‑CoV‑2亚单位疫苗；本发明的SARS‑CoV‑2亚单位疫苗安全性高，免疫诱导效力强，可以采用多种方式进行接种；尤其是，接种后能显著提高机体产生SCV2‑RBD抗原特异性抗体以及细胞毒性T细胞(CTL)水平。

技术领域

本发明涉及生物药物技术领域，具体涉及一种环二核苷酸修饰铝纳米粒疫苗佐剂- 传递系统及基于该VADS构建的SARS-CoV-2亚单位疫苗及其制备方法。

背景技术

目前正在发展的SARS-CoV-2疫苗主要包括如下类型。1)灭活SARS-CoV-2疫苗：是采用物理或化学方法直接杀灭SARS-CoV-2病原体直接作为疫苗制剂。2)减毒SARS-CoV-2活疫苗：用人工定向诱变方法消除病原体致病性，或者将SARS-CoV-2表面抗原Spike蛋白基因整合无致病性病毒载体，如腺病毒等，作为疫苗制剂。减毒活疫苗的免疫诱导效果较好，但存在基因突变产生致病性的风险，以及载体病毒自身诱导产生的免疫负效应。 3)核酸疫苗：包括RNA、DNA两种疫苗，是将蛋白抗原表达基因通过脂质纳米载体传递至细胞，表达抗原刺激机体产生免疫。4)亚单位疫苗(纯抗原组分疫苗)：将SARS-CoV-2 纯化抗原，与疫苗佐剂-传递系统结合，制备为疫苗制剂。

上述不同类型SARS-CoV-2疫苗各具特点与优势，但也均存在自身缺陷，概括而言突出表现为以下两方面。发展安全、强效、易于构建的VADS，仍是制备SARS-CoV-2亚单位疫苗的关键。

铝盐是常用的VADS，应用于临床已经有90多年的历史。传统铝佐剂虽然能激活Th2细胞分泌IL-4，进而促进Th2型体液免疫应答产生抗体，但难以有效诱导细胞免疫应答，无法促进机体产生细胞毒性T细胞。此外，较强的局部刺激性也是铝盐佐剂突出弱点，也是有待于人们研究克服的重点。

综上，铝盐作为疫苗佐剂，在安全性和免疫刺激效力方面都有待进一步研发优化。

发明内容

本发明构建了一种环二核苷酸修饰的铝纳米粒疫苗佐剂-传递系统CAN，以及基于该CAN的SARS-CoV-2亚单位疫苗。具体技术方案概括如下：

一种环二核苷酸修饰的铝纳米粒疫苗佐剂-传递系统，其特征在于：以铝纳米粒(AN) 为载体，所述铝纳米粒表面有环二核苷酸(CDN)分子修饰；AN:CDN的质量比为10～40:1；

优选AN:CDN的质量比为20:1。

优选地,所述环二核苷酸为环二单磷酸鸟苷(c-di-GMP，cyclic dimericguanosine monophosphate)，环二单磷酸腺苷(c-di-AMP，cyclic dimeric adenosinemonophosphate)， 2’3’-环单磷酸鸟-单磷酸腺苷酸(2’,3’-cGAMP，2’,3’-cyclic GMP-AMP)，或3’3’-环单磷酸鸟-单磷酸腺苷酸(3’3’-cGAMP，2’,3’-cyclic GMP-AMP)中的一种或多种；

优选2’3’-环单磷酸鸟-单磷酸腺苷酸。

优选地，所述铝纳米粒为氧化铝、磷酸铝或氢氧化铝铝纳米粒；

优选铝纳米粒粒径为100纳米以下。

上述任一所述的疫苗佐剂-传递系统的制备方法，其特征在于：取铝纳米粒溶液，在搅拌条件下加入环二核苷酸溶液，搅拌均匀，即得疫苗佐剂-传递系统—CAN；

优选铝纳米粒水溶液和环二核苷酸水溶液；

优选在室温下进行。