[发明专利]一种基于PK/PD模型的盐酸多西环素和氟苯尼考对呼吸道致病菌的给药方法

权利要求书

1.一种基于PK/PD模型的盐酸多西环素和氟苯尼考对呼吸道致病菌的给药方法,其特征在于,包括以下步骤：

步骤1：确定盐酸多西环素和氟苯尼考分别对猪胸膜肺炎放线杆菌和副猪嗜血杆菌的最佳联合用药比例，在盐酸多西环素和氟苯尼考应用最佳联合用药比例下，将盐酸多西环素和氟苯尼考在单独和联合下检测对猪胸膜肺炎放线杆菌和副猪嗜血杆菌的体外药物敏感性，并统计MIC的分布；

步骤2：采用体外和半体内药效学实验方法测定对胸膜肺炎放线杆菌和副猪嗜血杆菌的MIC、MBC、MPC、PAE和杀菌曲线，得到PD参数；

步骤3：选取健康组和患病组动物，建立疾病感染模型，采用液相色谱法和尿素氮检测法计算得到盐酸多西环素和氟苯尼考联合对胸膜肺炎放线杆菌和副猪嗜血杆菌的PK参数并测定半体内杀菌曲线；

步骤4：根据步骤3所得半体内杀菌曲线选择相应的PK-PD参数，并将PK-PD参数代入药代动力学软件，并在Sigmoid Emax PK-PD模型方程中模拟健康组和患病组肺泡液中药效学数据，得到不同抗菌效果(E₁＝0，E₂＝-3，E₃＝-4，分别代表抑制作用、治疗作用和根除作用)下的PK-PD值，代入剂量公式分别得到抑制剂量、治疗剂量和根除剂量。

步骤5：利用Mlxplore软件模拟根据步骤4所得抑制剂量、治疗剂量和根除剂量下致病菌随着体内药物浓度变化的生长变化，确定给药间隔，由此得到预防疾病、治疗疾病、彻底根除疾病的三种给药方法。

2.根据权利要求1所述一种基于PK/PD模型的盐酸多西环素和氟苯尼考对呼吸道致病菌的给药方法，其特征在于：所述体外和半体内药效学实验方法为根据MIC分布和实验要求，选择盐酸多西环素和氟苯尼考联合用药MIC90处的菌株进行血清型鉴定和小鼠毒力实验，MIC90为抑制90％细菌生长的最低药物浓度，通过血清型鉴定和小鼠毒力实验筛选出MIC90处致病性较强的猪胸膜肺炎放线杆菌和副猪嗜血杆菌，进行体外和半体内药效学实验，测定盐酸多西环素和氟苯尼考分别对筛选出的胸膜肺炎放线杆菌和副猪嗜血杆菌的MIC、MBC、MPC、PAE和杀菌曲线，得到PD参数。

3.根据权利要求1所述一种基于PK/PD模型的盐酸多西环素和氟苯尼考对呼吸道致病菌的给药方法，其特征在于：所述步骤3包括选取健康组和患病组动物和具有致病性的菌株，建立疾病感染模型，对健康组和患病组动物进行肌内注射药物，在给药前以及给药后不同时间点采取血浆和用支气管镜肺泡采样仪采取肺泡灌洗液，用不同时间点所得肺泡灌洗液测定半体内杀菌曲线，采用液相色谱法检测不同时间点所得肺泡灌洗液中的药物浓度和血浆中药物浓度，利用尿素氮检测法确定肺泡液中药物原始浓度，采用Winnonlin软件计算得到相关的PK参数；。

4.根据权利要求1所述一种基于PK/PD模型的盐酸多西环素和氟苯尼考对呼吸道致病菌的给药方法，其特征在于：所述步骤4中的药代动力学软件为Winnonlin软件。

5.根据权利要求1所述一种基于PK/PD模型的盐酸多西环素和氟苯尼考对呼吸道致病菌的给药方法，其特征在于：所述步骤1中的最佳联合用药比例采用微量肉汤棋盘法进行测定，并通过FIC公式判定有相加或协同作用，并通过琼脂法测定MIC分布。

6.根据权利要求1所述一种基于PK/PD模型的盐酸多西环素和氟苯尼考对呼吸道致病菌的给药方法，其特征在于：所述步骤2中选择致病性较强猪胸膜肺炎放线杆菌的血清型为5型菌株，选择致病性较强的副猪嗜血杆菌血清型5型菌株，将胸膜肺炎放线杆菌血清型5型中的MIC90菌株进行小鼠毒力实验，具体实验过程为：

选用57只KM健康小鼠，每株菌为一组，每组3只，经腹腔无菌注射0.2mL 1×107CFU/mL、1×108CFU/mL、1×109CFU/mL菌液，每天定时观察小鼠的存活状态，观察3天并记录每天各组小鼠的存活情况，将经攻毒菌株致死的小鼠观察病变后解剖，并在感染部位分菌培养，通过PCR鉴定出为阳性，则视为感染成功，选出毒性较强的菌株，副猪嗜血杆菌小鼠毒力实验同胸膜肺炎放线杆菌。