[发明专利]一种粪便样品总DNA提取方法

权利要求书

1.一种粪便样品总DNA提取方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1，对粪便样品预处理，收集样品中的菌体；

S2，对菌体进行物理破碎；

S3，将破碎后的样品反复冻融2-5次之后，进行酶解处理；

S4，将酶解后的样品离心，取上清液，向其中加入0.6-1.5倍上清液体积的异丙醇进行沉淀处理；

S5，将沉淀后的样品离心，收集沉淀，对沉淀溶解之后进行DNA过柱纯化，即得到粪便样品总DNA。

2.如权利要求1所述的粪便样品总DNA提取方法，其特征在于，所述步骤S1的具体操作为，

取180～200mg的粪便样品于离心管中，加入1000ul buffer PM，混匀成悬浮液，离心分离，去上清，收集到样品中的菌体。

3.如权利要求1所述的粪便样品总DNA提取方法，其特征在于，所述步骤S2的具体操作为，

向菌体中加入玻璃珠、900ul Lysis buffer I，混匀后用组织破碎仪破碎处理。

4.如权利要求1所述的粪便样品总DNA提取方法，其特征在于，所述步骤S3中，冻融的具体操作为：

将装有样品的离心管置于浮漂中，将浮漂用液氮冻5min后于室温下放3-4s，再放入65℃水浴5min，重复2-5次。

5.如权利要求1所述的粪便样品总DNA提取方法，其特征在于，所述步骤S3中，进行酶解处理的具体操作为，

向冻融结束后的样品中加入20ul Lysis Enzyme I，37℃温育20min；

再加入225ul 20％SDS及10ul Lysis Enzyme II，56℃温育30min，再65℃温育30min。

6.如权利要求1所述的粪便样品总DNA提取方法，其特征在于，所述步骤S4的具体操作为，

将酶解后的样品离心，取上清液，先加入等体积的Tris饱和酚溶液混匀；

再次离心分离，取上清液，加入0.6-1.5倍上清液体积的预冷的异丙醇，混匀，于-20℃下沉淀25-35min。

7.如权利要求1所述的粪便样品总DNA提取方法，其特征在于，所述步骤S5的具体操作为，

将沉淀后的样品离心分离，去上清，向沉淀中加入100uL 0.1×buffer PM、500uLBinding Buffer及5uL NaAc，震荡至沉淀溶解，得DNA溶液；

对DNA溶液离心分离，取上清液转移至DNA吸附柱中，静置后将DNA吸附柱离心，弃滤液；

向DNA吸附柱中加入Washing Buffer，离心洗涤两次，除去吸附膜上残存的洗涤液；

将DNA吸附柱置于新的离心管中，打开管盖静置3-5min；

向DNA吸附柱中加入60uL经预热至55℃的Elution Buffer，离心分离，得到的滤出液为含DNA的保存液，即得到粪便样品总DNA。

8.如权利要求7所述的粪便样品总DNA提取方法，其特征在于，还包括将含DNA的保存液于-20℃保藏。

9.如权利要求1所述的粪便样品总DNA提取方法，其特征在于，步骤S1之前，还包括对粪便样品的采集：

在22-26℃或4℃及以下的温度条件下，常规物流运输采集的粪便样品，并在3天内到达实验室进行处理。

10.如权利要求9所述的粪便样品总DNA提取方法，其特征在于，对采集来的粪便样品，立即放于-20℃～-80℃保存。