[发明专利]一种SmC4H蛋白及其构建与表达方法有效
| 申请号： | 202010793361.1 | 申请日： | 2020-08-10 |
| 公开（公告）号： | CN111748534B | 公开（公告）日： | 2022-05-10 |
| 发明（设计）人： | 赵舒媛;胡月;向蓓蓓;李晓雪;王勇;孙继奇 | 申请（专利权）人： | 天津中医药大学 |
| 主分类号： | C12N9/02 | 分类号： | C12N9/02;C12N15/70;C07K1/22;C12R1/19 |
| 代理公司： | 天津市三利专利商标代理有限公司 12107 | 代理人： | 李蕊 |
| 地址： | 301617 天津市*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 smc4h 蛋白 及其 构建 表达 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种SmC4H蛋白，其特征在于：其核苷酸序列如序列表SEQ.1所示。
2.权利要求1所述SmC4H蛋白的表达方法，其特征在于：具体步骤如下：
(1)从川西獐牙菜中提取总RNA；
(2)将RNA反转录成cDNA,基于SmC4H基因的全长cDNA序列，设计特异性引物，并进行PCR扩增；
(3)利用琼脂糖凝胶电泳对PCR产物检测鉴定，对目的片段进行切胶回收；
(4)将克隆载体PBCV与回收目的片段连接，构建PBCV-SmC4H取连接产物转化进入Escherichia coli Trans 5α；
(5)所得产物涂布于具有卡那霉素抗性的平板上，挑选阳性克隆，进行测序；
(6)将重组载体PBCV-SmC4H与PETX分别进行酶切，连接，成功构建表达载体PETX-SmC4H；
(7)转入大肠杆菌Escherichia coli Rosetta(DE3)中进行该蛋白的原核表达，利用镍柱对所获得的SmC4H蛋白进行纯化。
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