[发明专利]与花椰菜紫色基因紧密连锁的分子标记及应用

说明书

本发明公开了一种与花椰菜紫色基因紧密连锁的分子标记及应用，所述分子标记的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，其存在于紫色花椰菜6号染色体上。开发的用于紫色花椰菜辅助筛选的PCR引物，具有共显性、特异性强、稳定性好等优点，在60℃不产生非特异扩增，能够十分准确地检测出待测花椰菜材料是否为紫色。采用本发明的引物CaPur‑F/CaPur‑R对紫色花椰菜的辅助筛选，在幼苗期就能够快速筛选出目标株系。因此，采用该标记进行辅助选择，可以快速筛选目标单株、提高育种效率。

技术领域

本发明属于分子标记技术领域，具体涉及一种与花椰菜紫色基因紧密连锁的分子标记及应用。

背景技术

花椰菜(Brassica oleracea var.botrytis L.)属于芸薹属(Brassica)甘蓝类蔬菜，由于其营养丰富、质地脆嫩、味道鲜美，深受广大消费者的喜爱。近年来栽培面积和消费量迅速增长，目前花椰菜已成为国内外蔬菜市场的主要蔬菜种类之一。随着生活水平的提高，人们对高营养、高品质蔬菜的需求逐渐提高，对品种类型也要求多样化。紫色花椰菜是一种花球呈现紫色、富含花青素的花椰菜自然变异类型，而花青素是一种特殊的有机物，被医学界和营养学家认为具有抗氧化、防衰老、防肿瘤等作用。作为一种保健蔬菜，紫色花椰菜越来越受到人们的青睐，为餐桌增添了一道靓丽的风景线。对于育种工作者来说，培育出紫色花椰菜品种已成为花椰菜育种的重要目标之一。国内目前培育出一些紫色花椰菜品种，但利用传统育种方法，不仅费时费工，还效率低下。而利用分子标记辅助选择可在苗期快速实现对紫色花椰菜资源的筛选，育种工作者只需种植鉴定出目标株系即可，减少了盲目性和资源的浪费，加速育种进程。目前尚未见有关紫色花椰菜的分子标记的报道，因而有必要开发高效、简便的用于鉴定紫色花椰菜的分子标记。

发明内容

本发明的目的在于提供一种与花椰菜紫色基因紧密连锁的分子标记，该标记特异性强、稳定性好，能够快速有效地鉴定出紫色花椰菜材料。

为实现上述目的，本发明采取如下技术方案：

与花椰菜紫色基因紧密连锁的分子标记，所述分子标记的核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示，其存在于紫色花椰菜6号染色体上。

上述分子标记的分子标记引物为：

上游引物CaPur-F：5’-ACCGTATCAGCCGCATTA-3’，

下游引物CaPur-R：5’-AACACCCACAACCCCTCT-3’。

本发明还公开了上述分子标记引物在紫色花椰菜分子标记辅助育种中的应用。

其中，鉴定待测材料是否为紫色花椰菜的方法，具体为：利用引物CaPur-F、CaPur-R以被检测花椰菜材料的基因组DNA为模板进行PCR扩增，如果能扩增出如SEQ ID NO.1所示的487bp的特征条带，则所检测材料为纯合或杂合的紫色花椰菜，如果没有出现如SEQ IDNO.1所示的487bp的特征条带，则为非紫色花椰菜。

并且，当花椰菜基因型为SEQ ID No.1/SEQ ID No.1时，其为紫色的纯合株；当花椰菜基因型为SEQ ID No.1/-时，其为紫色杂合株；当花椰菜基因型为-/-时，其为非紫色的纯合株。

上述方法中，所述PCR扩增的体系为：PCR反应总体积为20μL，其中10μmol/L的上下游引物各1.0μL，北京全式金生物PCR SuperMix(货号AS112-11)10μL，40ng/μL的DNA模板4μL，ddH₂O 4μL。

上述方法中，所述PCR反应的条件为：94℃预变性5min；94℃变性30s，60℃退火30s，72℃延伸1min，35个循环；72℃延伸5min；4℃保存。