[发明专利]聚乙二醇化单修饰重组谷胱甘肽过氧化物酶GPX4突变体、制备方法及其应用在审
| 申请号： | 202010794083.1 | 申请日： | 2020-08-10 |
| 公开（公告）号： | CN111909908A | 公开（公告）日： | 2020-11-10 |
| 发明（设计）人： | 魏景艳;王艳伟;闫琦 | 申请（专利权）人： | 吉林大学 |
| 主分类号： | C12N9/08 | 分类号： | C12N9/08;C12N9/96;A23L33/17;A61K47/60;A61K38/44;A61P39/06;A61K8/66;A61K8/86;A61Q19/06 |
| 代理公司： | 长春吉大专利代理有限责任公司 22201 | 代理人： | 刘世纯;王恩远 |
| 地址： | 130012 吉林省长春市*** | 国省代码： | 吉林;22 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 聚乙二醇 修饰 重组 谷胱甘肽 过氧化物 gpx4 突变体 制备 方法 及其 应用 | ||
1.一种聚乙二醇化单修饰重组谷胱甘肽过氧化物酶GPX4突变体，其特征在于：其结构式如下所示，
其中，GPX4M表示重组谷胱甘肽过氧化物酶GPX4突变体，mPEG表示单甲氧基聚乙二醇琥珀酰亚胺琥珀酸酯中的单甲氧基聚乙二醇部分。
2.权利要求1所述的聚乙二醇化单修饰重组谷胱甘肽过氧化物酶GPX4突变体的制备方法，其特征在于：将活化的直链mPEG-SS和GPX4M混匀，在4～50℃、pH6.0～9.0条件下进行10～60min的共价偶联反应，然后加入甘氨酸终止反应，得到包含有活化的直链mPEG-SS、GPX4M和mPEG-GPX4M的混合液；其中，mPEG-GPX4M表示聚乙二醇化单修饰重组谷胱甘肽过氧化物酶GPX4突变体，mPEG-SS表示单甲氧基聚乙二醇琥珀酰亚胺琥珀酸酯，GPX4M表示重组谷胱甘肽过氧化物酶GPX4突变体，活化的直链mPEG-SS的摩尔量为GPX4M的1～50倍；然后将混合液用凝胶色谱分离纯化，收集含有目标产物mPEG-GPX4M的洗脱峰并进行透析除盐，将透析袋内产物冻干，即得到mPEG-GPX4M；最后通过变性聚丙烯酰胺凝胶电泳同时结合考蓝染色和碘染色两种染色方式鉴定目标产物。
3.如权利要求2所述的聚乙二醇化单修饰重组谷胱甘肽过氧化物酶GPX4突变体的制备方法，其特征在于：活化的直链mPEG-SS的平均分子量为2～30kD。
4.如权利要求3所述的聚乙二醇化单修饰重组谷胱甘肽过氧化物酶GPX4突变体的制备方法，其特征在于：活化的直链mPEG-SS的平均分子量为5～20kD。
5.如权利要求2所述的聚乙二醇化单修饰重组谷胱甘肽过氧化物酶GPX4突变体的制备方法，其特征在于：活化的直链mPEG-SS的摩尔量是GPX4M的1～30倍。
6.如权利要求5所述的聚乙二醇化单修饰重组谷胱甘肽过氧化物酶GPX4突变体的制备方法，其特征在于：活化的直链mPEG-SS的摩尔量是GPX4M的5～20倍。
7.如权利要求2所述的聚乙二醇化单修饰重组谷胱甘肽过氧化物酶GPX4突变体的制备方法，其特征在于：共价偶联反应是在4～20℃，pH7.5～9.0条件下进行；共价偶联反应的时间为10～30min。
8.如权利要求2所述的聚乙二醇化单修饰重组谷胱甘肽过氧化物酶GPX4突变体的制备方法，其特征在于：甘氨酸与活化的直链mPEG-SS的摩尔比为1：1。
9.权利要求1所述的聚乙二醇化单修饰重组谷胱甘肽过氧化物酶GPX4突变体在制备抗氧化药物、化妆品或保健品方面的应用。
10.权利要求1所述的重组谷胱甘肽过氧化物酶GPX4突变体在制备抗氧化药物、化妆品或保健品方面的应用。
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