[发明专利]磷脂、CpG-ODN及环二核苷酸共修饰的铝纳米疫苗佐剂-传递系统及其制备方法

权利要求书

1.一种磷脂、CpG-ODN及环二核苷酸共修饰的铝纳米疫苗佐剂-传递系统，其特征在于：以铝纳米粒为载体，在铝纳米粒表面覆盖有磷脂双分子层，且由CpG-ODN及环二核苷酸分子共修饰；

所述CpG-ODN分子是指含非甲基化胞嘧啶-鸟嘌呤二核苷酸基序的单链寡脱氧核苷酸分子，其中含有20～30个核酸单体。

优选所述CpG-ODN分子的序列为：5’-TCGTCGTTTTCGGCGCGCGCCG-3’。

2.如权利要求1所述的疫苗佐剂-传递系统，其特征在于：所述环二核苷酸为环二单磷酸鸟苷，环二单磷酸腺苷，2’3’-环单磷酸鸟-单磷酸腺苷酸，和3’3’-环单磷酸鸟-单磷酸腺苷酸中的一种或多种；

优选2’3’-环单磷酸鸟-单磷酸腺苷酸。

3.如权利要求1所述的疫苗佐剂-传递系统，其特征在于：所述磷脂为磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰甘油(PG)、磷脂酰丝氨酸(PS)、鞘磷脂(SP)中一种或多种，

优选磷脂酰胆碱(PC)。

4.如权利要求1至3任一项所述的疫苗佐剂-传递系统，其特征在于：所述磷脂双分子层中还含有荷电脂质分子，用于调节载体荷电性质；

优选，所述荷电脂质分子为1，2-二油酰-3-三甲铵基丙烷；

磷脂双分子层中，磷脂与荷电脂质分子的质量比为6～12:1。

5.如权利要求1至4任一项所述的疫苗佐剂-传递系统，其特征在于：所述铝纳米粒为氧化铝、磷酸铝或氢氧化铝铝纳米粒；

优选铝纳米粒粒径为100纳米以下。

6.权利要求1至5任一项所述的疫苗佐剂-传递系统的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)将铝纳米粒与CpG-ODN及环二核苷酸水溶液混合，形成CpG-ODN/CDN共修饰的AN，即AN-CGC；

(2)将得到的AN-CGC溶液与磷脂材料混合，形成磷脂分子覆盖AN-CGC，即形成PLAN-CGC；

优选磷脂材料是磷脂固体薄膜、或磷脂的乙醇溶液、或脂质体溶液；

材料质量比满足：铝纳米粒/CpG-ODN/环二核苷酸＝50:2～5:1～2；铝纳米粒/磷脂＝10:1～2；

优选材料质量比满足：铝纳米粒/CpG-ODN/环二核苷酸＝50:5:1；铝纳米粒/磷脂＝5:1；

优选当磷脂相变温度低于室温时，步骤(2)在室温下进行；当磷脂相变温度高于室温时，步骤(2)在高于磷脂相变温度5℃以上温度下进行；

优选所述脂质体溶液是用HEPES缓冲溶液配制得到。

7.一种VADS运载疫苗，其特征在于：是在权利要求1至5任一项所述的疫苗佐剂-传递系统的分子上连接或吸附有疫苗成分。

8.如权利要求7所述的VADS运载疫苗，其特征在于：疫苗成分为病原体抗原Ag或灭活病原体；

优选病原体抗原；

优选所述VADS运载疫苗的剂型为液体制剂或冷冻干燥获得的冻干品。

9.权利要求7或8所述的VADS运载疫苗的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

获得权利要求1-5任一所述的疫苗佐剂-传递系统PLAN-CGC；

然后将病原体抗原或灭活病原体吸附于PLAN-CGC表面，即得；

优选病原体抗原溶于HEPES缓冲液；

优选铝纳米粒/病原体抗原或灭活病原体的质量比为10:1。

10.权利要求7或8所述的VADS运载疫苗的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

取铝纳米粒水溶液，在搅拌条件下加入CpG-ODN及环二核苷酸水溶液，搅拌均匀，即形成CpG-ODN及环二核苷酸共修饰的铝纳米粒AN-CGC；

然后将病原体抗原吸附于AN-CGC上；再与磷脂材料混合，搅拌至混合均匀，即得；

优选病原体抗原溶于HEPES缓冲液；铝纳米粒/病原体抗原的质量比为10:1。