[发明专利]一种转基因表达载体及其应用

权利要求书

1.一种转基因表达载体，所述表达载体为重组表达载体，所述重组表达载体上连接有抗逆性基因，所述抗逆性基因包括LEA8981基因和抗除草剂基因bar，所述LEA8981基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，所述抗除草剂基因bar的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

2.根据权利要求1所述的转基因表达载体，其特征在于，所述重组表达载体为pCAMBIA3301重组表达载体，所述重组表达载体上还连接有Ubiquitin启动子，所述Ubiquitin启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示。

3.根据权利要求1或2所述的转基因表达载体在制备转基因植物中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述转基因植物为抗逆性植物。

5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述LEA8981基因插入转基因植物的10号染色体中，位于Os10g0351414和Os10g0351457两个基因之间。

6.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述抗逆性植物为单子叶植物；优选地，所述单子叶植物为水稻。

7.一种转基因植物的制备方法，包括将含有抗逆基因的重组表达载体导入植物细胞，得到抗逆性植物；所述抗逆性基因包括LEA8981基因和抗除草剂基因bar，所述LEA8981基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，所述抗除草剂基因bar的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。

8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述转基因植物具体通过包括以下步骤的方法制得：

1）设计引物扩增Ubiquitin启动子和LEA8981基因，然后将所述Ubiquitin启动子和LEA8981基因酶切后，分别连接至pGEM-T载体中，得到Ubi-T载体和8981-T载体；

2）然后再酶切Ubi-T载体和LEA8981-T载体，分别得到Ubiquitin启动子和LEA8981基因；

3）再将步骤2）中得到的所述Ubiquitin启动子和LEA8981基因依次插入到pCAMBIA3301载体的多克隆位点中，得到pCAMBIA3301重组表达载体；

4）然后将所述pCAMBIA3301重组表达载体导入农杆菌中，得到重组农杆菌，再将其导入植物细胞，得到抗逆性植物。

9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述Ubiquitin启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示。

10.根据权利要求7至9中任一项所述的制备方法，其特征在于，所述转基因植物抗逆性植物；优选地，所示抗逆性植物为单子叶植物；更为优选地，所述单子叶植物为水稻。