[发明专利]几丁质酶基因、几丁质酶及其制备方法和应用

说明书

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种几丁质酶基因、几丁质酶及其制备方法和应用。本发明几丁质酶基因chiam的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，其是通过对来源于地中海拟无枝菌酸菌Amycolatopsis mediterranei几丁质酶的序列进行综合优化得到。本发明几丁质酶ChiAm的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，其不仅丰富了几丁质酶的种类和来源途径，而且酶比活为48U/mg，在较宽的温度范围和较宽的pH范围内均表现出良好的稳定性，具有良好的应用前景和产业价值。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及几丁质酶基因chiam及相应的重组表达载体、重组表达菌株，以及几丁质酶ChiAm及其制备方法和应用。

背景技术

几丁质是由N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖通过β-1,4糖苷键随机连接而成的直链多聚物，其结构与纤维素类似。几丁质是自然界仅次于纤维素的可再生多糖，同时也是最丰富的天然高分子化合物之一。几丁质的水解产物几丁寡糖作为一种生物活性物质具有良好的生理功能，可以应用于生物医药、食品加工、农业种植、畜牧养殖等行业。目前几丁寡糖的制备主要分为物理法、化学法以及酶法。相对于物理法和化学法，酶法制备几丁寡糖具备许多优势，如：反应条件温和、产物结构完整、过程易于控制、对环境无污染等。

几丁质酶作为一种生物酶能够专一性的分解几丁质，从而产生不同分子量的几丁寡糖。由于几丁质酶在几丁寡糖酶法制备过程中发挥着重要作用，国内外许多科学家对其展开了研究。目前限制几丁质酶产业化应用的主要问题在于其发酵活力低，生产成本高。因此降低几丁质酶生产成本，是其广泛应用于不同领域的基础。

发明内容

本发明的目的是提供几丁质酶基因chiam及相应的重组表达载体、重组表达菌株，以及几丁质酶ChiAm及其制备方法和应用，旨在解决现有几丁质酶存在的发酵活力低的技术问题。

为了实现上述发明目的，本发明一方面，提供了一种几丁质酶基因chiam，其核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。

本发明另一方面，提供了一种几丁质酶ChiAm，所述几丁质酶ChiAm是本发明提供的几丁质酶基因chiam编码的蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。

本发明再一方面，提供了一种重组表达载体，其包括本发明提供的几丁质酶基因chiam。

本发明又一方面，提供了一种重组表达菌株，其包括本发明提供的重组表达载体。

本发明还有一方面，提供了一种几丁质酶ChiAm的制备方法，其包括如下步骤：

提供几丁质酶基因chiam、表达载体和表达菌株；

对所述几丁质酶基因chiam进行扩增，所得扩增产物与所述表达载体进行连接，得到重组表达载体；

将所述重组表达载体转入表达菌株，得到重组表达菌株；

对所述重组表达菌株进行培养，得到几丁质酶ChiAm；

其中，所述几丁质酶基因chiam的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，所述几丁质酶ChiAm的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。

本发明最后一方面，提供了本发明几丁质酶ChiAm或本发明几丁质酶ChiAm的制备方法制备得到的几丁质酶ChiAm在水解几丁质中的应用。