[发明专利]一种金针菇线粒体提取方法

权利要求书

1.一种金针菇线粒体提取方法，其特征在于，步骤如下：

1)将样品用巯基乙醇溶剂浸泡，离心弃上清，得到浸泡处理的样品；

2)将浸泡处理的样品用山梨醇重悬，得到浸泡处理样品重悬液，在浸泡处理样品重悬液中加入蜗牛酶进行酶解，离心弃上清，得到酶解后的样品；

3)将酶解后的样品使用Mito-Cyto Buffer重悬，离心收集上清；

4)将步骤3)得到的上清离心，收集沉淀，得到线粒体；

步骤1)所述浸泡的时间为15～30min，所述浸泡的温度为32℃；

步骤2)所述蜗牛酶添加的质量为所述浸泡处理样品质量的3～4％；所述酶解的时间为55～65min；所述酶解的温度为37℃；

步骤1)所述样品挑选未开伞、子实体完整、无污染无机械伤和菇柄长度10～15cm的金针菇；

步骤1)和步骤2)所述离心的条件独立地为：离心转速500×g，离心时间3～5min；

步骤3)所述离心的条件分别为：离心转速750～850×g，离心时间5～6min；

步骤4)所述离心的条件为：离心转速10000～12000×g，离心时间10～15min。

2.根据权利要求1所述的金针菇线粒体提取方法，其特征在于，步骤1)所述样品的质量和巯基乙醇溶剂的体积比为1g：(5～10)μl。

3.根据权利要求1所述的金针菇线粒体提取方法，其特征在于，步骤2)所述浸泡处理样品的质量与山梨醇的体积比为1g：450～500μl。

4.根据权利要求1所述的金针菇线粒体提取方法，其特征在于，步骤3)所述酶解后样品的质量与Mito-Cyto Buffer的体积比为0.5～1.5g：5ml。

5.根据权利要求1所述的金针菇线粒体提取方法，其特征在于，步骤4)所述离心弃上清后，还包括对沉淀进行清洗，所述清洗用缓冲液包括PBS缓冲液。