[发明专利]有机溶剂法制备载药笼状蛋白

权利要求书

1.一种包载药物的笼状蛋白的制备方法，包括以下步骤：

步骤(a)：制备含有有机溶剂、药物和笼状蛋白的混合溶液；

和步骤(b)：制备含有内腔包载药物的笼状蛋白的溶液；

任选地，还包括步骤(c)：去除笼状蛋白笼外的游离药物和有机溶剂；

优选地，步骤(a)采用混合或者溶液置换的方式；

所述溶液置换采用如下一种或两种以上的工艺进行：

工艺A：通过透析的方式将笼状蛋白的溶液笼外溶液置换成为含有有机溶剂的溶液；

工艺B：通过离心过滤的方式；优选地，所述离心过滤选用超滤离心管离心过滤，进一步优选地，所述超滤离心管截留分子量为50-150KD，优选100KD；

工艺C：通过凝胶过滤层析的方式；优选地，所述凝胶过滤层析的方式是使用Superdex75pg凝胶柱过滤层析。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其中，步骤(a)中所述有机溶剂选自二甲基亚砜、氯仿、甲醇和异丙醇中的一种或两种以上；优选地，所述有机溶剂选自二甲基亚砜、甲醇和/或氯仿；进一步优选地，所述有机溶剂选自二甲基亚砜。

3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其中，步骤(a)中所述混合溶液中有机溶剂的体积浓度为5-30％，优选地，所述混合溶液中有机溶剂的体积浓度为5-25％，进一步优选地，所述混合溶液中有机溶剂的体积浓度为7-20％，进一步优选地，所述混合溶液中有机溶剂的体积浓度为7-15％，进一步优选地，所述混合溶液中有机溶剂的体积浓度为7-10％。

4.根据权利要求1-3任一项所述的制备方法，其中，步骤(a)所述混合溶液含有水、Tris-HCl、HEPES-NaCl缓冲液、乙二胺四乙酸(EDTA)缓冲液、三(羟甲基)氨基甲烷-乙二胺四乙酸(TE)缓冲液、丙烯酰胺缓冲液中的一种或两种以上；优选地，所述缓冲溶液选自Tris-HCl；

进一步优选地，所述Tris-HCl的浓度为10-100mmol/L；进一步优选地，所述Tris-HCl的浓度为25-75mmol/L；进一步优选地，所述Tris-HCl的浓度为40-75mmol/L；进一步优选地，所述Tris-HCl的浓度为45-55mmol/L，进一步优选地，所述Tris-HCl的浓度为50mmol/L。

5.根据权利要求1-4任一项所述的制备方法，其中，所述笼状蛋白选自铁蛋白、小热休克蛋白(sHsp)病毒衣壳蛋白或网格蛋白有被小泡；优选地，所述笼状蛋白选自铁蛋白；

进一步优选地，所述铁蛋白含有L亚基和/或H亚基，进一步优选地，所述铁蛋白含有L亚基和H亚基的数量比为0-24:24-0，进一步优选数量比为9:1，24:0或0:24。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其中，所述铁蛋白选自野生型铁蛋白、铁蛋白突变体、铁蛋白衍生物和/或重组铁蛋白；优选地，所述铁蛋白来源包括人、动物、植物和/或细菌；进一步优选地，人来源的铁蛋白选自人H型铁蛋白和/或人L型铁蛋白；动物来源的铁蛋白选自马脾铁蛋白；细菌来源的铁蛋白选自激烈火球菌铁蛋白。

7.根据权利要求1-6任一项所述的制备方法，其中，所述步骤(a)所述混合溶液中笼状蛋白的浓度为1-20mg/mL；优选为2-8mg/mL，进一步优选为2-6mg/mL。