[发明专利]热稳定性提高的麦芽寡糖基海藻水解酶突变体及其应用

权利要求书

1.一种麦芽寡糖基海藻糖水解酶突变体，其特征在于，

所述突变体是通过将氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的麦芽寡糖基海藻糖水解酶的第137位氨基酸由亮氨酸突变为甲硫氨 酸得到的；

或所述突变体是通过将氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的麦芽寡糖基海藻糖水解酶的第216位氨基酸由丙氨酸突变成苏氨酸得到的。

2.编码权利要求1所述突变体的基因。

3.携带权利要求2所述基因的重组质粒。

4.如权利要求3所述的重组质粒，其特征在于，所述重组质粒的载体为pUC质粒载体、pET质粒载体或pGEX质粒载体。

5.携带权利要求2所述基因，或权利要求3或4所述重组质粒的工程化细胞。

6.如权利要求5所述的工程化细胞，其特征在于，其宿主细胞为细菌或真菌。

7.制备权利要求1所述突变体的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)根据确定的突变位点，设计定点突变的突变引物，以携带麦芽寡糖基海藻糖水解酶基因的载体为模板进行定点突变；构建含有编码突变体的基因的质粒载体；

(2)将突变体质粒转化进宿主细胞；

(3)挑选阳性克隆工程化细胞进行发酵培养，发酵结束后，将发酵获得的发酵液进行离心，收集细胞，细胞破壁上清液即为突变体麦芽寡糖基海藻糖水解酶的粗酶液。

8.权利要求1所述麦芽寡糖基海藻糖水解酶突变体，或权利要求2所述基因，或权利要求3或4所述重组质粒，或权利要求5或6所述工程化细胞，或权利要求7所述制备方法在生产海藻糖中的应用。

9.一种生产海藻糖的方法，其特征在于，使用权利要求1所述的麦芽寡糖基海藻糖水解酶突变体。