[发明专利]一种快速检测瘤胃球菌的荧光定量PCR引物组、试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种快速检测瘤胃球菌的荧光定量PCR引物组，及其在制备检测瘤胃球菌的荧光定量PCR试剂或试剂盒方面的应用，引物组包括正向引物和反向引物，正向引物和反向引物序列依次如SEQ ID NO：1‑2所示；引物组的特异性强，准确度高，稳定性好。发明还公开了一种快速检测瘤胃球菌的荧光定量PCR试剂盒，及其在临床或科研检测瘤胃球菌中的应用，包括上述特异性引物组，并优化了反应体系和反应条件，可以特异的从复杂样本中定量检出瘤胃球菌，与其他细菌无交叉反应；准确度高，重复性好，灵敏度强，可用于快速、敏感、准确地定量检测肠道菌群中的瘤胃球菌。

技术领域

本发明涉及分子生物学检测技术领域，尤其涉及一种快速检测瘤胃球菌的荧光定量PCR引物组、试剂盒及其应用。

背景技术

肠道菌群是人类肠道中数量庞大的微生物群体，其组成和改变与宿主的健康状况密切相关，菌群在人体的代谢、免疫等方面都发挥着至关重要的作用，菌群失衡会导致一系列疾病的发生。

瘤胃球菌是人体肠道当中的原籍菌，属革兰氏阳性厌氧细菌，存在于牛和绵羊的瘤胃等处，在严格厌氧条件和37℃下生长。瘤胃球菌为球形或类球形，直径1微米或更小，单个、成对或成链出现；其代谢为典型的混合发酵，代谢产物复杂多样，对人体健康状况影响较大。美国麻省总医院(MGH)布罗德研究所和哈佛医学院的研究人员在研究中发现，活泼瘤胃球菌(Ruminococcusgnavus)会释放某种多糖(或糖分子链)，触发免疫反应，与克罗恩病(CD)和其他形式的炎症性肠病(IBD)等直接相关。布罗德核心研究所成员、传染病和微生物组项目联合主任Ramnik Xavier的实验室在此前的研究也证明，在克罗恩病的某些爆发期，R.gnavus在肠道菌群的丰度可以从不足1％跃升至超过50％。

瘤胃球菌在人类肠道中的存在及代谢情况对克罗恩病(CD)和其他形式的炎症性肠病(IBD)等多种疾病相关性较大，因此，有必要开发一种快速、特异、可精准定量的瘤胃球菌检测手段，为炎症性肠病筛查及与瘤胃球菌有关疾病的研究提供技术支持。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的之一在于提供一种快速检测瘤胃球菌的荧光定量PCR引物组，根据瘤胃球菌的16SrRNA基因组序列设计，特异性强，扩增瘤胃球菌的准确度高，稳定性好；

本发明的目的之二在于提供一种上述引物组在制备检测瘤胃球菌的荧光定量PCR试剂或试剂盒方面的应用。

本发明的目的之三在于提供一种快速检测瘤胃球菌的荧光定量PCR试剂盒，包括上述特异性引物组，并优化了反应体系，可以特异的从复杂样本中检出瘤胃球菌，与瘤胃球菌以外的其他细菌无交叉反应；准确度高，重复性好，灵敏度强，可用于快速、敏感、准确地定量检测肠道菌群中的瘤胃球菌。

本发明的目的之四在于提供一种上述试剂盒在临床或科研检测瘤胃球菌中的应用，进一步优化了PCR扩增条件，荧光信号的强弱与模板扩增产物的对数线性关系好，定量检测准确度高；且操作简单，自动化程度高，交叉污染少，结果判读明确、直观。

本发明的目的之一采用如下技术方案实现：

一种快速检测瘤胃球菌的荧光定量PCR引物组，包括正向引物和反向引物；所述正向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，所述反向引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：2所示。

本发明的目的之二采用如下技术方案实现：

快速检测瘤胃球菌的荧光定量PCR引物组在制备检测瘤胃球菌的荧光定量PCR试剂或试剂盒方面的应用。

本发明的目的之三采用如下技术方案实现：

一种快速检测瘤胃球菌的荧光定量PCR试剂盒，包括上述的引物组；其中，正向引物和反向引物的体积比为1:1。

进一步地，上述试剂盒还包括SYBR Green Reaction Mix、ROX和无菌水。