[发明专利]粮油作物中多种生物毒素的检测方法

说明书

本发明揭示了一种粮油作物中多种生物毒素的检测方法，其特征在于，包括：(1)分别称取不同种类的真菌毒素标样，采用乙腈为溶剂分别对各标样进行溶解并定容获得1mg/mL标准溶液的母液，再稀释成标准溶液，备用；(2)取40g的被测样品原形态样本和60mL纯水放入100mL容积的烧杯中，在将烧杯放入超声波生物毒素提取装置内提取2min，在将烧杯中下层有机相全部转移到离心管中，于40℃以下水浴氮吹至干，加入2m乙腈+水溶液将离心管中残留物溶解并混匀，滤膜过滤即得待测液；(3)制备获得的标准梯度溶液及待测液，液质联用检测，记录数据，(4)计算分别得到待测液中不同种类生物毒素的含量。本发明测定生物毒素结果准确，为粮食中真菌毒素的检测和污染风险评估提供可靠的保障。

技术领域

本发明涉及检测技术领域，具体涉及一种粮油作物中多种生物毒素的检测方法。

背景技术

粮油原料主要有小麦、玉米、高粮，大米以及糯米，由于含有丰富的营养物质，在田间和储存过程中常受到多种真菌的污染而产生真菌毒素。例如镰刀菌产生脱氧雪腐镰刀菌烯醇(Deoxynivalenol，DON)、玉米赤霉烯酮(Zearalenone，ZEN)和伏马毒素(Fumonisins，FBs)，黄曲霉产生黄曲霉毒素(Aflatoxins，AFs)。欧盟已制定了玉米中DON、ZEN、AFs、FBs、赭曲霉毒素(OTA)、T-2和HT-2等真菌毒素的法规限量和推荐限量，我国食品安全国家标准规定玉米原粮中DON限量为1000μg/kg，ZEN限量为60μg/kg，黄曲霉毒素B1(AFB1)限量为20μg/kg，OTA限量为5μg/kg。

真菌毒素的检测方法主要有酶联免疫法、高效液相色谱法、液相色谱-质谱联用法等。其中，酶联免疫法作为快速筛查方法被广泛使用，具有前处理简单、可批量检测样品的优点，但每次只能检测一种真菌毒素，且易受油脂基质干扰，出现假阳性，准确性降低。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的缺陷，提供一种粮油作物中多种生物毒素的检测方法，以提高真菌毒素检测的准确性。

为实现上述目的，本发明提出一种粮油作物中多种生物毒素的检测方法，包括：

(1)标准溶液的配制：分别称取不同种类的真菌毒素标样，采用乙腈为溶剂分别对各标样进行溶解并定容获得1mg/mL标准溶液的母液，再根据需要利用乙腈+水溶液将母液稀释成设定浓度的标准溶液，备用；

(2)待测液制备：取40g的被测样品原形态样本和60mL纯水同时放入100mL容积的烧杯中，在将烧杯放入超声波生物毒素提取装置内提取2min，在将烧杯中下层有机相全部转移到离心管中，于40℃以下水浴氮吹至干，加入2ml乙腈+水溶液将离心管中残留物全部溶解并混匀，经过0.45μm滤膜过滤即得待测液；

(3)分别取制备获得的标准梯度溶液及待测液，液质联用检测，记录数据，

(4)计算结果：利用液质联用仪器自带软件，外标法峰面积定量，计算分别得到待测液中不通种类生物毒素的含量。

优选地，超声波生物毒素提取装置为21kHz的定频超声波提取装置。

优选地，所述步骤(3)中，检测的色谱-质谱条件为：

色谱条件：流动相：5mmol/L乙酸铵水溶液(A)和乙腈(B)，流速：0.25ml/min，进样量：20μL，色谱柱：InertsilC8(5μm，2.1ID×150mm)，柱温：30℃，色谱柱平衡时间：2min，

梯度洗脱条件如下：0～1min，乙腈相溶剂百分比以10％维持1min，1～3min，线性增加到60％；3～5min，乙腈相溶剂百分比再从60％增加到95％；5～10min，乙腈相溶剂百分比95％维持5min；10～15min，乙腈相溶剂百分比10％维持5min；

质谱条件：离子源：ESI源，离子化方式：正离子和负离子切换，扫描模式：多反应监测。