[发明专利]一种用于人ADRB1基因1165位点核苷酸多态性检测的荧光PCR方法

说明书

本发明提供用于检测ADRB1基因c.1165位点(G/C)核苷酸多态性的引物、探针、荧光PCR检测方法。根据“等位基因特异PCR”原理，在实时荧光定量PCR技术平台上检测β1肾上腺素受体ADRB1基因c.1165位点的核苷酸类型，具有操作简便、快速、低成本等优点。

技术领域

本发明属于生物医学临床分子检测领域，具体涉及用于人ADRB1基因c.1165位点核苷酸多态性检测的荧光PCR方法。

背景技术

随着社会经济的发展和居民生活方式的改变，慢性非传染性疾病已经成为影响我国乃至全球居民健康的重大公共卫生问题，而高血压是患病率高的慢性病之一，也是心脑血管疾病最重要的危险因素。据世界卫生组织统计资料显示，2012年全球心血管病死亡人数为1700 万，占慢性病死亡人数的46％，而其中高血压并发症死亡940万，高血压已经成为影响全球疾病负担的首要危险因素。2016年国家卫生计生委发布的数据显示：我国18岁及以上成人高血压患病率为25.2％。尽管近些年我国人群的高血压知晓率、治疗率、控制率已有改善，但仍处于较低水平。虽然国家积极倡导健康生活方式、低盐饮食、加强体育锻炼等方式可以降低高血压危险因素的流行水平，但通过药物控制血压水平并预防其并发症仍然是主要的干预方式。治疗高血压的常见药物可分别钙通道拮抗药、血管扩张药、利尿药、肾素-血管紧张素系统抑制药和交感神经抑制药等五大类。多年的临床研究发现，这些药物的临床疗效在不同患者间的差异比较大，可能与患者的具体生理状态及遗传背景的差异密切相关。遗传药理学研究表明引起个体间药物疗效的差异的主要原因来自于个体之间基因的多态性，导致药物作用的相关因素：药物转运体、药物代谢酶以及药物作用靶点(受体)在不同个体间客观存在差异，使得个体间的血药浓度和药物敏感性显著不同。

肾上腺素受体是一类介导儿茶酚胺作用的G蛋白耦联型组织受体，分为α和β两类。β肾上腺素受体(β-adrenoceptorβ-AR)与α肾上腺素受体一样以肾上腺素和去甲肾上腺素为内源性配体，通过调节细胞内cAMP水平，介导多数器官与组织的功能调节，许多药物也是直接或间接通过这一受体发挥效应的。

β1-肾上腺素受体(β1adrenergic receptor，ADRB1)，参与人体对血压的调节，其基因的多态性与高血压密切相关。G1165C是ADRB1基因上与心血管疾病相关的多态性位点。G1165C导致受体蛋白Gly389Arg多态性，该部位为受体与G蛋白偶联的部位，是受体后信息传递的关键结构。389Arg等位基因的发生频率在黑人为0.58，白人及亚洲人为0.72～0.76。黑人的C等位基因频率与其他种族间存在显著性差异。Liggett等在分别表达Gly389与Arg389 型受体的中国仓鼠成纤维细胞(CHW)中进行的竞争性结合实验表明，这两种受体与激动剂结合的亲和力无差别，但这一遗传多态性明显改变受体与G蛋白的偶联：无论是基础腺苷酸环化酶活性还是激动剂刺激的最大腺苷酸环化酶活性，Arg389型受体都显著增高。整体水平的研究表明，服用不同剂量美托洛尔后，Gly389纯合子与Arg389纯合子健康受试者的心血管反应存在显著性差异，表现为Arg389纯合子静息心率、运动心率及收缩压的降低均显著高于Gly389型受试者。进一步的临床试验发现，β1受体阻滞药抗高血压病的治疗效果与β1 肾上腺素受体Gly389Arg多态性突变的基因型相关，美托洛尔对携带不同基因型的高血压患者的疗效存在基因剂量效应，提示β1受体单倍型可作为这类药物抗高血压病疗效的预测因子，临床可根据病人的基因型调整给药剂量，以提高疗效，降低不良反应。2017年由国家卫生计生委合理用药专家委员会和中国医师协会高血压专业委员会联合颁布的《高血压合理用药指南(第2版)》里增加了药物基因组学相关内容，明确指出ADRB1基因多态性可影响β受体阻滞剂(如美托洛尔)的疗效。

多年来，国内外对ADRB1多态性基因型进行分析，大多采用DNA扩增后直接测序法。其操作繁琐、检测周期长、通量较低，不适用于大规模的人群快速筛选。另外，由于其需要昂贵的仪器设备，难以实现大规模推广。

发明内容