[发明专利]一种含脂肪干细胞提取物的抗皱精华液及其制备方法

权利要求书

1.一种含脂肪干细胞提取物的抗皱精华液，其特征在于，是由如下重量份数的成分组成：脂肪干细胞外泌体悬液8-20份、脂肪干细胞细胞内含物8-20份、绿豆肽0.5-2份、罗非鱼多肽0.5-2份、蝎毒多肽0.5-2份、甘油1-6份、乙二醇0.1-4份、黄原胶0.1-4份、透明质酸0.1-4份、苯氧乙醇1-2份、乙基己基0.03-0.05份、EDTA0.1-0.2份、聚山梨醇酯0.3-0.8份、氧化卵磷脂1-2份、生育酚1-5份、蒸馏水55.2-94.92份。

2.如权利要求1所述的一种含脂肪干细胞提取物的抗皱精华液，其特征在于，是由如下重量份数的成分组成：脂肪干细胞外泌体悬液 8份、脂肪干细胞细胞内含物8份、绿豆肽0.5份、罗非鱼多肽0.5份、蝎毒多肽0.5份、甘油1.5份、乙二醇1.5份、黄原胶0.25份、透明质酸0.15份、苯氧乙醇1份、乙基己基0.03份、EDTA0.1份、聚山梨醇酯0.3份、氧化卵磷脂1份、生育酚0.03份、蒸馏水75.67份。

3.如权利要求1所述一种含脂肪干细胞提取物的抗皱精华液，其特征在于，所述脂肪干细胞外泌体悬液中每毫升溶液含有20mg蛋白质。

4.如权利要求1所述一种含脂肪干细胞提取物的抗皱精华液，其特征在于，所述脂肪干细胞细胞内含物中每毫升溶液含有20mg蛋白质。

5.如权利要求1所述一种含脂肪干细胞提取物的抗皱精华液，其特征在于，所述脂肪干细胞外泌体悬液的制备方法为生理盐水冲洗脂肪组织，重复2-3次，去除血渍；加入与脂肪组织等体积的酶液，37℃消化30-40min，消化后的储液瓶内加入2m培养基；将消化后的组织液100目筛网过滤，收集消化液至离心管中，离心；离心后去除上清液，重悬离心后的细胞沉淀；按照50000个/CM² 的细胞密度，接种于T75培养瓶，培养瓶中添加15mL培养基，移入5%CO₂，37℃培养箱中培养；24h后换液，每隔4天左右进行一次換液，细胞融合度达到70％～80％时，即可进行传代或冻存；在4℃下，首先300×g离心10min，吸取上清液，然后2000Xg离心10min；吸取上清液后，10000×g高速离心30min，吸取上清液，14000g超速离心90min；除去上清液，所获得的沉淀即为外泌体，用PBS缓冲液洗涤沉淀并重悬后，140000×g再次离心90min，生理盐水重悬沉淀，冻存于-80℃备用，使用时直接放于冰上解冻即可添加至精华液中。

6.如权利要求1所述一种含脂肪干细胞提取物的抗皱精华液，其特征在于，所述脂肪干细胞细胞内含物的制备方法为生理盐水冲洗脂肪组织，重复2-3次，去除血渍；加入与脂肪组织等体积的酶液，37℃消化30-40min，消化后的储液瓶内加入2m培养基；将消化后的组织液100目筛网过滤，收集消化液至离心管中，离心；离心后去除上清液，重悬离心后的细胞沉淀；按照50000个/CM² 的细胞密度，接种于T75培养瓶，培养瓶中添加15mL培养基，移入5%CO₂，37℃培养箱中培养；24h后换液，每隔4天左右进行一次換液，细胞融合度达到70％～80％时，即可进行传代或冻存；使用T75培养瓶培养细胞融合至80-90%，弃去培养基，生理盐水清洗2-3次，每次12ml，每瓶加入3ml不含动物源胰酶替代物消化3min，加入1ml不含动物源血清替代物终止消化，用10ml培养基重悬瓶内细胞，转移至50ml离心管内，1000rpm离心10mim，离心后用1ml生理盐水重悬细胞，使用超声破碎仪将细胞破碎，是细胞内含物溶解到生理盐水中，1000rpm离心10min，弃去沉淀中多余的细胞碎片，用孔径为22μm筛网过滤上清液，弃去多余杂质，保留上清液中的有效成分。