[发明专利]具有中和狂犬病病毒效能的冲洗液及其活性检测方法

权利要求书

1.一种具有中和狂犬病病毒效能的冲洗液，其特征在于，所述冲洗液包括：0.9％生理盐水、吐温-20、效价不低于100IU/ml的人源抗狂犬病抗体、EDTANa₂和壳聚糖。

2.一种基于权利要求1所述的具有中和狂犬病病毒效能的冲洗液的制备方法，其特征在于，所述制备方法为：取0.9％生理盐水500mL，添加10mL吐温-20，最终效价不低于0.5IU/ml的人源抗狂犬病抗体，添加EDTANa₂和壳聚糖之后补充0.9％生理盐水，最终至1000mL，过滤除菌后于2-8℃备用。

3.一种基于权利要求1所述的具有中和狂犬病病毒效能的冲洗液的活性检测方法，其特征在于，所述活性检测方法包括：

步骤一、冲洗液的配制，准备实验材料，根据配方配制冲洗液；

步骤二、冲洗液抗病毒活性检测，参考《中国药典》2015年版三部中检测狂犬病抗体活性的“快速荧光灶抑制试验(RFFIT)”方法进行细胞水平的活性检测，并以SPF级昆明小鼠为试验对象，试验动物水平的使用效果；

步骤三、冲洗液使用场所的确定，由于本品所含成分均为医药级原料，不含任何防腐剂和刺激性成分，安全无毒，具有较高的稳定性，可在狂犬病处置门诊直接替代常规的流水伤口冲洗，也可以配制成浓缩液，与处置门诊中的冲洗装置配合稀释用。

4.根据权利要求3所述的一种具有中和狂犬病病毒效能的冲洗液的活性检测方法，其特征在于：所述步骤一中，所需的实验材料包括0.9％生理盐水、吐温-20、高效价人源抗狂犬病抗体、EDTANa₂以及壳聚糖。

5.根据权利要求3所述的一种具有中和狂犬病病毒效能的冲洗液的活性检测方法，其特征在于：所述步骤一中，冲洗液的制备配方为：取0.9％生理盐水500mL，添加10mL吐温-20，人源抗狂犬病抗体，添加EDTANa₂和壳聚糖之后补充0.9％生理盐水，最终至1000mL，过滤除菌后于2-8℃备用。

6.根据权利要求3所述的一种具有中和狂犬病病毒效能的冲洗液的活性检测方法，其特征在于：所述步骤二中，进行细胞水平的活性检测包括以下步骤：

(1)取样：取细胞培养用无菌96微孔板，每孔加100μl含10％胎牛血清的DMEM培养基；

(2)样本稀释：首先将标准品和新型冲洗液进行3倍系列稀释，其中标准品稀释至9倍，冲洗液稀释至3倍；

(3)加样：取9倍稀释的标准品50μl加到2.1.1步骤中的96微孔板，即第1孔为27倍稀释；取3倍稀释新型冲洗液50μl上板，即第1孔为9倍稀释；

(4)二次稀释：用排枪从第1列每孔取50μl加到第二列中，混匀后继续取50μl到第3列，如此3倍系列稀释直到第12列；

(5)加毒：取固定滴度的狂犬病病毒CVS株50μl到上述微孔中，置37℃恒温培养箱中和1hr；

(6)静置培养：中和完毕后每孔加入50μlBSR细胞，置37℃恒温培养箱培养24hr；

(7)结果检测：培养完毕后弃培养上清，加入80％冷丙酮固定20分钟后，加入50μlFITC标记的抗核蛋白单抗温育1hr，之后弃上清，PBS溶液洗板1次后置倒置荧光显微镜下观察每孔的荧光感染情况。

7.根据权利要求3所述的一种具有中和狂犬病病毒效能的冲洗液的活性检测方法，其特征在于：所述步骤二中，进行试验动物水平的使用效果测试时，模拟咬伤三级暴露情况，采用不同组合进行干预，每组重复三次。