[发明专利]抗B7-H3嵌合抗原受体的编码基因、制备方法、具有该基因的质粒、免疫细胞及其应用

说明书

本发明公开了抗B7‑H3嵌合抗原受体的编码基因、制备方法、具有该基因的质粒、免疫细胞及其应用，其中，抗B7‑H3嵌合抗原受体编码基因，其特征在于，至少包含了表达IL15和CCL21的人工核苷酸序列。本发明提供的抗B7‑H3嵌合抗原受体的编码基因增强了CIK细胞对实体瘤细胞的杀伤效应。

技术领域

本发明涉及基因技术领域，尤其涉及抗B7-H3嵌合抗原受体的编码基因、制备方法、具有该基因的质粒、免疫细胞及其应用。

背景技术

恶性肿瘤治疗中，传统疗法包括手术治疗、放射治疗、化疗、中药治疗和免疫疗法。免疫治疗方法抗肿瘤治疗目前正在世界各地的临床试验，如白血病或淋巴瘤。已有两种经FDA批准上市。目前针对CD19、CD22的CAR-T细胞治疗血液系统肿瘤已经取得重大进步，且疗效显著，但是针对实体瘤的CAR-T细胞治疗进展缓慢且效果不佳，缺乏安全有效的特异性肿瘤抗原靶点是重要的阻碍因素之一。

因此，开发一种抗B7-H3嵌合抗原受体、制备方法及其应用，不但具有迫切的研究价值，也具有良好的经济效益和工业应用潜力，这正是本发明得以完成的动力所在和基础。

发明内容

为了克服上述所指出的现有技术的缺陷，本发明人对此进行了深入研究，在付出了大量创造性劳动后，从而完成了本发明。

具体而言，本发明所要解决的技术问题是：提供抗B7-H3嵌合抗原受体的编码基因、制备方法、具有该基因的质粒、免疫细胞及其应用，以提高免疫细胞对实体瘤的治疗效果。

为解决上述技术问题，本发明的技术方案是：

第一方面，本发明提供了抗B7-H3嵌合抗原受体编码基因，其中，至少包含了表达IL15和CCL21的人工核苷酸序列。

本发明中，作为优选的技术方案，所述抗B7-H3嵌合抗原受体编码基因中，包括抗原结合区、跨膜结构区、共刺激信号传导区和T细胞信号传导区功能结构域。

本发明中，作为优选的技术方案，所述抗B7-H3嵌合抗原受体包括顺序连接的

(1)导引子Leader核酸人工序列(SEQ ID NO.2)

(2)Anti-B7-H3 antigen antibody single chain Fv antibody(scFv)核酸人工序列(SEQ ID NO.3)

(3)CD8Hinge区核酸人工序列(SEQ ID NO.4)

(4)CD8跨膜区核酸人工序列(SEQ ID NO.5)

(5)CD226胞内区核酸人工序列(SEQ ID NO.6)

(6)CD3ζ胞内区核酸人工序列(SEQ ID NO.7)

(7)T2A-IL15-CCL21核酸人工序列(SEQ ID NO.8)。

本发明中，作为优选的技术方案，所述抗B7-H3嵌合抗原受体编码基因的核苷酸序列表如SEQ ID NO.1所述。

第二方面，本发明提供了抗B7-H3嵌合抗原受体编码基因的制备方法，包括如下步骤：

(1)分别按融合基因片段导引子Leader的核酸人工序列、Anti-B7-H3的核酸人工序列、CD8的核酸人工序列、linker的核酸人工序列、CD8TM的核酸人工序列、CD226的核酸人工序列、CD3ζ的核酸人工序列、T2A-IL15-CCL21核酸人工序列的顺序委托生工生物工程(上海)有限公司合成其整个表达框，插入pLent-EF1α-FH-CMV-GFP-P2A-Puro中，得到pLent-EF1α-CAR(B7-H3)-IL15-CCL21；