[发明专利]一种核酸提取纯化方法

权利要求书

1.一种核酸提取纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1：将样品放入均质杯内，均质杯内加入培养基，均质混合，培养12小时；

S2：将裂解液、结合液、磁珠溶液、洗涤液1、洗涤液2、洗脱液、GT缓冲液于试剂条空位中；

S3：将样品液移至样品管中，加入PEG8000溶液；

S4：将试剂条、样品管、吸头放置于核酸提取仪中，吸头吸取磁珠溶液转移至样品管中，将样品溶液、PEG8000溶液与磁珠溶液充分混合，使磁珠充分抓取样品中的微生物；

S5、将含有微生物的磁珠转移到含有GT缓冲液的孔中进行孵化裂解微生物外壳，将细胞乃至核酸暴露出来；加入裂解液，在65℃环境下将裂解液、含微生物磁珠及GT缓冲液利用PST充分混匀，反复吹打；加入结合液及磁珠于裂解好的混合液中，充分混合，让加入的磁珠在结合液环境下特异结合核酸；利用磁铁富集混合液中的磁珠，然后转移至洗涤液1中，反复吹打，除去核酸中的大量杂质；利用磁铁富集的磁珠转移至含有洗涤液2中，反复吹打，用磁铁富集磁珠除去废液；将含有核酸的磁珠自然环境下晾干，除去残留的乙醇；取洗脱液，将磁珠与洗脱液充分混合，吹打，除去磁珠，收集含有核酸的洗脱液，备用；

S6：测量核酸值；

所述磁珠溶液为申请人生产的恺硕CL纤维素磁珠用40%乙醇稀释成1倍质量浓度。

2.如权利要求1所述的一种核酸提取纯化方法，其特征在于，所述PEG8000溶液由PEG8000置于80℃环境下充分溶解，按体积比加入配制好的2mol/L、pH6.0的Tris-Hcl溶液，当所述样品溶液量少于200 μl时，加入1 ml 20% PEG8000；样品溶液量为200-500 μl时，加入1 ml 30% PEG8000；样品溶液量大于500 μl时，加入等样品溶液体积的40% PEG800。

3.如权利要求1所述的一种核酸提取纯化方法，其特征在于，所述培养基为LB培养基。

4.如权利要求1所述的一种核酸提取纯化方法，其特征在于，所述裂解液包括：LSS 4~5.6%（W/V）、曲拉通5.2~10% 、吐温10~15% 、盐酸胍62.5~70% 、尿素10%（W/V）。

5.如权利要求1所述的一种核酸提取纯化方法，其特征在于，所述结合液包括：异丙醇75~85% 、8 mol/L乙酸铵15~25%。

6.如权利要求1所述的一种核酸提取纯化方法，其特征在于，所述洗涤液1包括：无水乙醇45~55%、8 mol/L盐酸胍45~55%。

7.如权利要求1所述的一种核酸提取纯化方法，其特征在于，所述洗涤液2包括：无水乙醇75~85% 、水14.5~24.5% 、Tris溶液0.5%。

8.如权利要求1所述的一种核酸提取纯化方法，其特征在于，所述洗脱液包括：无水乙醇75~85% 、水14.5~24.5% 、Tris溶液0.5%。

9.如权利要求1所述的一种核酸提取纯化方法，其特征在于，所述GT缓冲液包括：SDS、2mol/L、pH8.5 Tris-Hcl溶液、0.5mol/LEDTA。