[发明专利]Garcinone E在制备肿瘤细胞自噬小体诱导剂中的应用

说明书

本发明公开了Garcinone E在制备肿瘤细胞自噬小体诱导剂中的应用。本发明首次发现Garcinone可以有效诱导鼻咽癌和卵巢癌细胞自噬小体增多，诱导鼻咽癌细胞中自噬标志蛋白LC3A/B‑I和LC3A/B‑II表达水平升高，p62表达水平降低。而与Garcinone E有相同母环结构且对肿瘤细胞增殖活力有抑制作用的阴性对照化合物Garcinone C不诱导鼻咽癌和卵巢癌细胞自噬小体数量增多，诱导卵巢癌细胞自噬相关蛋白Beclin‑1、LC3A/B‑II和Atg7等蛋白表达水平升高，LC3A/B‑I表达量不升高。提示Garcinone E可在制备新型自噬小体诱导剂用于抗肿瘤研究中发挥重要作用。

技术领域

本发明属于细胞自噬技术领域，具体涉及Garcinone E在制备肿瘤细胞自噬小体诱导剂中的应用。

背景技术

Garcinone E(分子式C₂₈H₃₂O₆，分子量464.55008，CAS号112649-21-5)是从山竹果皮中提取的氧杂蒽酮类单体化合物，研究显示其具有抗肿瘤效果。目前Garcinone E在肿瘤尤其是卵巢癌方面的相关研究较少，对肿瘤细胞自噬小体的诱导未见报道。Garcinone C(分子式C₂₃H₂₆O₇，分子量414.44834，CAS号76996-27-5)也是从山竹果皮中提取的氧杂蒽酮类单体化合物，与Garcinone E有相同的母环结构，研究显示其对部分肿瘤细胞的增殖活力有显著抑制作用，也具有抗肿瘤效果。

细胞自噬(autophagy)又称为II型程序性细胞死亡，是指隔离膜包裹细胞质和或细胞器等待降解物形成自噬小体，然后与溶酶体融合形成自噬溶酶体以降解其所包裹的内容物，最终实现细胞本身代谢需要和细胞器更新的过程。在正常的生理情况下，因为哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin，mTOR)的抑制作用，细胞保持基础的自噬活性。但当应激事件如营养缺乏、低氧应激和药物诱导等情况发生时，细胞自噬将被激活以维持细胞稳态。在肿瘤细胞自噬研究中经常需要观察肿瘤细胞中自噬小体的数量，市面上常用的阳性对照自噬小体诱导方法主要有利用饥饿培养条件(如EBSS饥饿培养基)诱导、自噬诱导剂雷帕霉素(Rapamycin,Rapa)诱导、溶酶体抑制剂氯喹(chloroquine,CQ)等。但我们在实际实验过程中发现这类增加自噬小体数量的诱导方法并不具有通用性，针对不同的肿瘤细胞，需要对试剂处理浓度和时间进行大量的摸索，才能找到适宜的阳性对照试剂及其剂量和处理时间。例如，我们在进行鼻咽癌和卵巢癌细胞自噬研究过程中，针对鼻咽癌细胞HK1、HONE1和卵巢癌细胞HeyA8、SKOV3，尝试使用EBSS、Rapa和CQ来诱导自噬小体，结果发现EBSS和Rapa的诱导效果都不好，仅有CQ处理可观察到自噬小体增多的阳性结果。如果能够找到更多新型的自噬小体诱导剂，必将有助于肿瘤自噬研究。

发明内容

本发明的第一个目的是提供Garcinone E在制备肿瘤细胞自噬小体诱导剂中的应用。所述的Garcinone E的结构如式(I)所示：

进一步的，所述的肿瘤为鼻咽癌或卵巢癌。

本发明通过使用浓度为5μM和10μM的Garcinone E处理鼻咽癌细胞HK1和HONE148h，处理卵巢癌细胞HeyA8 72h、SKOV3 48h，研究Garcinone E对肿瘤细胞自噬小体的诱导能力，结果表明，Garcinone E显著诱导鼻咽癌细胞HK1、HONE1和卵巢癌细胞HeyA8、SKOV3自噬小体数量增多。

本发明的第二个目的是提供Garcinone E在制备增加自噬囊泡数量的制剂中的应用。

本发明的第三个目的是提供Garcinone E在制备促进LC3A/B-I和LC3A/B-II蛋白表达的制剂中的应用。