[发明专利]米碎花中抗PRRSV病毒成分的制备与应用

说明书

本发明设计医药技术领域，提供了一种米碎花的抗病毒应用，特别涉及米碎花中抗PRRSV成分的制备与应用。本发明该米碎花(学名：Eurya chinensis R.Br.)中提取分离的化合物Betulinic acid、α‑amyrin、taxifolin、hydroxytyrosol，体外抗病毒实验首次发现具有抗PRRSV活性，为制备治疗猪蓝耳病毒提供了新的安全植物和天然化合物，为制备抗猪蓝耳病毒的药物或药物组合物提供有力的技术支持。米碎花具有良好的抗病毒活性，并且其具有抗病毒活性成分。鉴于其药食同源，又有很高的市场经济价值。

技术领域

本发明涉及一种米碎花的抗病毒应用，特别涉及米碎花中抗PRRSV病毒成分的制备与应用。

背景技术

猪繁殖与呼吸综合征(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome,PRRS)，是一种以感染猪发热、厌食，妊娠母猪晚期流产、早产、产死胎、弱胎和木乃伊胎，各种年龄猪(特别是仔猪)呼吸障碍为特征的高度传染性疾病。猪蓝耳病传播速度快，尤其在技术进步和经济发达国家，由于猪群密集、流动频繁，更易引起流行。在一个严重流行期过后，此病常为地方流行性,长期危害养猪生产，给养猪业造成巨大的经济损失。该病1987年在美国首次报道，之后在德国、荷兰、加拿大等国相继出现报道，随后迅速蔓延至亚洲及其它地区，给全球养猪业带来了巨大的损失。PRRS主要由猪繁殖和呼吸障碍综合症病毒(PRRSV)所引起。PRRSV的防控是目前我国乃至世界的难题。PRRSV具有较高的感染性，用10个或更少的病毒粒子，通过鼻腔和肌肉途径都能使猪感染，感染后的猪从唾液、尿、精液和乳汁中排毒，病毒通过直接或间接方式感染易感猪群。PRRSV可以在小于30m距离的猪群间直接传播。猪场之间的传播方式是以感染猪或者带病毒的精液为主要传播方式。由于该病的巨大危害性，所以国际兽疫局(OIE)将该病列为B类传染病，我国将该病列为二类传染病。国内外学者在研究PRRSV防控方面做了大量的工作，在疫苗预防和西药防治方面取得一定的进展。目前市面上的PRRSV疫苗主要有灭活苗和弱毒苗，但是灭活疫苗的保护效果并不理想，弱毒苗存在散毒的危险，并且在免疫的过程中可能会出现毒力返强的状况。国内常见报道，因接种PRRSV疫苗发生母猪流产，产死胎的事件。因此，研究和开发天然、绿色的药物促进PRRSV疫苗作用或替代PRRSV疫苗地位，达到促进畜禽免疫功能和健康状况、提高动物抵抗蓝耳病毒感染成为动物传染病研究领域的热点课题之一。

米碎花(学名：Eurya chinensis R.Br.)，山茶科灌木，根及全株可入药。米碎花在广东地区(尤为东莞)常被用作茶饮品，广东人爱饮茶，除了喝绿茶等常规茶外，民间喝草本茶的习惯由来已久，米碎花茶也作为其中一种。此外，据古典籍《全国中草药汇编》、《中华本草》记载：“米碎花性味归经：甘、淡，微涩，凉。功能主治：清热解毒，除湿敛疮。用于预防流行性感冒；外用治烧烫伤，脓泡疮。蛇虫咬伤；外伤出血。”米碎花也被用在中药复方中，用来治疗偏头痛，带状疱疹，肺炎球菌，尿道炎，口腔溃疡等疾病。因此，我们推测米碎花具有良好的抗病毒活性，并且其具有抗病毒活性成分。鉴于其药食同源，又有很高的市场经济价值。

发明内容

本发明的目的是提供米碎花抗抗PRRSV成分的提取分离与鉴定及其应用。

本发明的米碎花抗PRRSV成分的提取分离与鉴定是通过以下的技术方案得以实现的：

取米碎花叶晒干粉碎，经95％酒精浸提，重复操作三次，浓缩得浸膏，用纯水混悬，经乙酸乙酯萃取得乙酸乙酯部浸膏。

乙酸乙酯部位经工业大孔树脂D-101脱色素，先用30％乙醇洗脱至流出液为无色，再用90％乙醇洗脱至流出液无色，收集该部位流出液并减压浓缩，后硅胶柱层析，得9个组分Er.1-Er.9。

Er.1经硅胶柱(正己烷、乙酸乙酯体系梯度洗脱)层析，得到Er.1-1、Er.1-2、Er.1-3。Er.1-1经HPLC(35％乙腈/水)层析得化合物Betulinic acid。