[发明专利]一种同时制备地胆草内酯、异地胆草内酯的方法

说明书

本发明公开了一种同时制备地胆草内酯、异地胆草内酯的方法。本发明提供的方法利用大孔树脂柱层析和高速逆流色谱可以从地胆草中同时制备得到地胆草内酯、异地胆草内酯，纯度分别为98.9％、99.4％。

技术领域

本发明属于化学领域，涉及一种同时制备地胆草内酯、异地胆草内酯的方法。

背景技术

地胆草Elephantopus scaber L.为菊科地胆草属植物，以根部入药，其性寒、味苦，具有凉血、解毒、利湿等功效，主要用于治疗感冒、扁桃体炎、眼结膜炎、黄疸、湿疹、肾炎水肿等。现代药理学研究表明地胆草属植物具有抗肿瘤、抗炎、抗病毒、抗菌等活性。

地胆草内酯和异地胆草内酯是地胆草中的两种化学成分，研究表明其具有药理活性广泛。

现有的用于制备地胆草内酯和异地胆草内酯的方法步骤繁琐，工业化生产难度大。高速逆流色谱技术(high speed counter-current chromatography，HSCCC)是一种新型的无固体载体的连续、高效的液液分配色谱技术，采用多层缠绕的螺旋管柱，由柱体的高速行星式运动产生的不对称离心力场实现两相溶剂体系的高效混合、分配及充分保留，形成连续流萃取，从而实现不同溶解分配系数的溶质在两相溶剂中的高效分离。HSCCC与同级别制备型高效液相层析相比，具有高回收率、高制备量、高纯度、高活性保留、低试剂消耗及低分离成本等优点，在科学研究过程中发挥着越来越大的作用。

目前还没有使用HSCCC同时分离纯化地胆草内酯和异地胆草内酯的方法。

发明内容

本发明的意图在于提供一种同时制备地胆草内酯、异地胆草内酯的方法。

技术方案如下：

一种同时制备地胆草内酯、异地胆草内酯的方法，步骤如下：

(1)总提取物的制备

取1kg洁净干燥的地胆草根部，粉碎，用10L70％乙醇热回流提取，更换新鲜的溶剂重复提取1次，合并提取液，过滤，减压浓缩至提取液中没有醇味，过滤，备用；

(2)大孔树脂预处理和装柱

将DM130大孔树脂依次用5％盐酸、5％氢氧化钠分别浸泡4h，水洗至中性，湿法装于内径为5cm的色谱柱中，用去离子水以最大流速淋洗压实柱床，柱床高度40cm；

(3)大孔树脂上样和粗提物的富集

将总提取物的浓缩液上样于大孔树脂柱，然后先用10个柱体积的去离子水淋洗，再用60％乙醇淋洗，收集第7、8个柱体积的淋洗液，减压浓缩至提取液中没有醇味，过滤，冷冻干燥得到粗提物；

(4)高速逆流色谱纯化

溶剂系统的配制：溶剂系统为体积比6:3:5.5:3的正己烷-乙酸乙酯-乙醇-水。按体积比量取溶剂，混合，充分振荡，静置过夜分层，分别取上、下相，超声脱气，备用；

样品溶液的配制：取200mg粗提物用上、下相各10mL的混合溶剂振荡溶解；

启动高速逆流色谱仪，柱温35℃，以20mL/min的流速泵入上相作为固定相，泵满后，将HSCCC主机设置为正转方式，转速缓慢调至850r/min，再以2mL/min的速度泵入下相作为流动相，启动色谱工作站检测HSCCC流出液基线信号。待基线平稳说明固定相和流动相达到平衡状态，加入样品溶液进行HSCCC分离，色谱工作站于235nm波长下记录色谱图，根据色谱峰和保留时间接收地胆草内酯、异地胆草内酯各自对应的流出液，浓缩干燥。

优选地，用10L70％乙醇热回流提取2h。

优选地，用去离子水以最大流速淋洗8h压实柱床。