[发明专利]COL5A3突变基因及其在原发性青光眼基因检测中的应用

说明书

本发明首次提供了一种特定的人COL5A3突变基因，该突变基因是由于野生型COL5A3基因发生g.[163_166delGACC]缺失突变而形成的，所述突变基因片段序列如Seq ID NO：2所示。携带g.[163_166delGACC]突变的COL5A3突变基因将导致原发性青光眼的发生，且患者常伴随有关节疼痛症状。可以采用SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6所示序列的引物来对携带g.[163_166delGACC]突变的COL5A3突变基因片段进行扩增。本发明提供的COL5A3特定突变基因可以为原发性青光眼致病机理的解析、致病基因检测、治疗药物的开发以及针对性预防和治疗等提供依据和奠定基础，也可以用于指导生育和辅助第三代试管婴儿技术中对于胚胎的筛选。

技术领域

本发明涉及基因及其应用，特别涉及原发性青光眼致病基因即COL5A3突变基因及其检测试剂盒和检测方法。

背景技术

青光眼是全球常见的且不可逆的严重致盲性眼部疾病，以视神经损害为主要特征，表现为与眼内压病理性增高相关的视神经节细胞进行性的凋亡，从而造成视力的逐渐缺失。通常青光眼是一种与年龄相关的疾病，40岁以后发病率显著增高。而原发性青光眼即先天性青光眼（Primary Congenital Glaucoma, PCG，OMIM：231300）是由于胚胎期发育障碍，致使房角结构先天异常或胚胎组织残留，阻塞房水排出通道而导致眼压升高，致使整个眼球不断增大，因此多在出生时已存在眼部异常，大多在儿童期即造成不可逆性的视功能损害，成年以前病情变化显著，严重危害着婴幼儿及青少年的视力发育，这种缺陷可以导致终身视觉残疾。儿童青光眼在一般眼病患者中仅占到0.01％-0.04％，而在盲人中可占到2％-15％，是一种重要的致盲性眼病。

由于PCG发病较早，如不及时察觉，一旦视力损伤则造成不可逆的致盲结果，严重影响患者生活质量。如若及时发现并采取治疗手段，则至少可以保存部分视力，对PCG致病基因和病理机制的深入研究将有助于其早期预防和治疗。PCG病例常呈现家族聚集性，以常染色体隐性遗传最为多见，目前已经揭示出了多种PCG致病相关基因，已知的比较明确的致病基因有2个，分别是CYP1B1和LTBP2基因；TEK基因突变也能够引起常染色体显性遗传型PCG。早期诊断和早期治疗是防治PCG患者视功能进行性损害的有效途径，因此PCG的相关基因检测对其临床诊断、治疗方案制定和预后评估都具有非常重要的意义，而PCG致病基因的全面揭示是基因检测的基础和前提。

本发明申请人从11例原发性青光眼家族聚集性家系相关患者样本的基因测序结果中发现，有5例家系中的PCG患者均出现了COL5A3基因的特定突变，而同时此5例家系中的PCG患者均有不同程度的关节疼痛表征。经进一步扩大病例数验证显示，本发明申请人首次揭示了COL5A3基因为原发性青光眼致病基因并提供了其致病突变形式，在此基础上构建了基于PCR扩增和Sanger测序的突变片段检测试剂盒和检测方法。

发明内容

本发明提供了一种原发性青光眼的致病基因及其致病基因突变形式，并在此基础上构建了致病基因突变的检测试剂盒和对应的检测方法。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案如下：

本发明的目的之（1）在于提供一种发生g.[150insCT]突变的COL5A3突变基因，该突变基因序列如SEQ ID NO:1所示；携带g.[150insCT]突变的COL5A3突变基因将导致原发性青光眼的发生，且患者常伴随有关节疼痛症状。SEQ ID NO:1仅展现出g.[150insCT]突变所在的基因片段序列，COL5A3突变基因的其余序列参见NCBI登录号NC_000019.10所示片段中第9959561-10010532范围内的序列。可以采用SEQ ID NO：5和SEQ ID NO：6所示序列的引物来对携带g.[150insCT]突变的COL5A3突变基因片段进行扩增和检测。