[发明专利]一种异位处理禽畜粪污的专用菌剂及其制备方法

权利要求书

1.一种异位处理禽畜粪污的专用菌剂，其特征在于，包括以下质量份数的原料：重金属钝化菌3-5份、芽孢杆菌4-6份、草分枝杆菌3-8份、枯草芽孢杆菌6-10份、粪肠球菌8-15份、深海红螺菌10-20份、就地堆肥地芽孢杆菌2-6份、诱导剂10-25份、稳定剂30-50份。

2.根据权利要求1所述的一种异位处理禽畜粪污的专用菌剂，其特征在于，所述诱导剂为木糖、酒石酸钾钠和MgSO₄中的一种或者数种。

3.根据权利要求1所述的一种异位处理禽畜粪污的专用菌剂，其特征在于，所述稳定剂为经121℃高温灭菌的麦饭石。

4.一种异位处理禽畜粪污的专用菌剂的制备方法，其特征在于，包括以下具体步骤：

S1，重金属钝化菌株选育：

a、从重金属污染农田中采集土壤，过200目筛，取0.1-0.2g土壤，放入盛有90mL无菌水的三角瓶，150-200rpm震荡1h，制成土壤悬液；

b、制备含重金属离子的筛选培养基YEP：其中YEP培养基由牛肉粉3g，蛋白胨10g，酵母粉10g，氯化钠2g，维生素VB₁₀10mg，琼脂粉12g，纯水1000mL制成，121℃灭菌20min，每升YEP培养基中加入1-10mL初始浓度为10000ppm的CdCl₂溶液，K₂Cr₂O₇溶液，PbCl₂溶液和CuCl₂溶液，调节Cd²⁺，Cr₂O₇^2-，Pb²⁺和Cu²⁺终浓度为10-100ppm，倒平板，冷却；

c、吸取1mL土壤悬液，采用灭菌水梯度稀释10¹-10⁹倍，分别吸取各稀释度土悬液0.1mL，均匀涂布于Cd²⁺，Cr₂O₇^2-，Pb²⁺和Cu²⁺终浓度为10-100ppm的YEP培养基固体平板，28℃恒温培养2-3d；

d、待平板上长出单菌落后，挑取单菌落至Cd²⁺，Cr₂O₇^2-，Pb²⁺和Cu²⁺终浓度为10-100ppm的YEP培养基固体平板，划线培养。重复此步骤，连续划线纯化3-4次，直至获得对Cd²⁺，Cr₂O₇^2-，Pb²⁺和Cu²⁺均具有一定耐受性的纯菌；

e、获得的纯菌进行保存；

S2，功能菌株单株发酵：将芽孢杆菌、草分枝杆菌、枯草芽孢杆菌、就地堆肥地芽孢杆菌、粪肠球菌和深海红螺菌六株菌株分别单独进行发酵，获得发酵菌液，具体如下：

芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌和就地堆肥地芽孢杆菌，采用改良LBG培养基培养24-36h，接种量为1％-2％，摇床转速为180-200rpm；

粪肠球菌采用MRS培养基培养24-36h，接种量为1％-2％，摇床转速为180-200rpm；

草分枝杆菌采用培养基培养24-36h，接种量为1％-2％，摇床转速为180-200rpm；

深海红螺菌采用改良红螺菌培养基培养24-36h，接种量为1％-2％，摇床转速为180-200rpm；

S3，复合菌液制备：上述各单菌株发酵结束后，将芽孢杆菌、草分枝杆菌、枯草芽孢杆菌、就地堆肥地芽孢杆菌、粪肠球菌和深海红螺菌六株菌株新鲜发酵液按照1-3:5-8:4-7:6-8:1-2:2-3的体积比混合，制得复合菌液，其中有效活菌数为1.9×10⁹-3.1×10⁹cfu/ml；

S4，新鲜培养基添加：按质量浓度0.5％-1.5％向复合菌液中加入新鲜培养基质-甘蔗糖蜜，其含糖分50％以上，锤度Bx85％以上；

S5，诱导剂添加：按质量浓度0.1-1％向S3中得到的复合菌液中加入木糖、酒石酸钾钠和MgSO₄中的一种或者数种，振荡培养1-2h；

S6，稳定剂添加：按质量浓度1％-3％向S4中得到的复合菌液中加经121℃高温灭菌的麦饭石，搅拌均匀，即可制得可以有效钝化粪污重金属的异位发酵床专用菌剂。