[发明专利]一种猪用疫苗中外源性病毒的检测试剂、试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种猪用疫苗中外源性病毒检测试剂，包括：PCR特异性引物、或探针，其中所述引物或探针对包括具有SEQ ID NO.1所示核苷酸序列的引物和探针、和/或环具有SEQ ID NO.2所示核苷酸序列的引物和探针、和/或环具有SEQ ID NO.3所示核苷酸序列的引物和探针。本发明的检测方法能够对BVDV、PCV2、PPV感染进行快速、及时、准确的诊断，是控制并消灭这三种外源性病原对生物制品感染的前提。本发明的检测方法可以检测到10拷贝数，敏感性较高，可以满足生物制品生产中外源病毒BVDV、PCV2、PPV污染的检测要求。

技术领域

本发明涉及猪用疫苗的检测方法领域，具体涉及猪用疫苗中外源性病毒的检测方法。

背景技术

生物制品中疫（菌）苗（减毒活苗与微生态制剂、灭活疫苗、组分疫苗、基因重组疫苗等）、类毒素、免疫血清、诊断制品等的生产与质量控制汇总的效力评价均涉及病原体。动物疫苗是由免疫原性较好的病毒微生物（细菌、病毒、立克次体、肿瘤细胞等）或其抗原性物质经繁殖和处理后制成的一类生物制品，接种动物机体后，刺激机体产生特异性抗体，当体内的抗体滴度达到一定数值后，就可以抵抗这种病原微生物的侵袭、感染，从而起到预防这种疾病的作用，动物疫苗的主要作用是预防传染病。动物疾病传入某一国家，其最主要的风险途径是通过进口活动物及动物产品，通过疫苗进口传入疾病则较为少见。但是由于动物疫苗本身产品的特殊性，在疫苗生产期间，若使用的种子毒、毒株、细胞培养物、动物或动物源性成份被污染，或发生交叉污染，或疫苗本身灭活工作没有做好的话，动物疫苗在生产过程中就会被污染。此类污染疫苗一经使用，就会将疫情直接传入动物体内。为此，对进口动物疫苗进行病毒安全性的研究，为控制其风险提供有力保障。

目前，还没有针对外源性病毒的快速，有效的检测试剂盒。

发明内容

为了解决现有技术中疗效不理想的问题，本发明从基因学方面提供了治疗方案。

本发明的技术方案为:

一种猪用疫苗中外源性病毒检测试剂,包括：PCR特异性引物、或探针，其中所述引物或探针对包括具有SEQ ID NO.1所示核苷酸序列的引物和探针、和/或环具有SEQ ID NO.2所示核苷酸序列的引物和探针、和/或环具有SEQ ID NO.3所示核苷酸序列的引物和探针。

进一步的,所述的探针和引物序列（5’-3’）为：BVDVF：ATGCCCTTAGTAGGACTAGC；和/或BVDVR：CAACTCCATGTGCCATGTACAGCAG；和/或BVDVP：FAM- AAAGGAGGGGACTAGCGGTAGCAG -BHQ1；和/或PCV2F：CGGGAGTGGTAGGAGAAG；和/或PCV2R：TACTACAGAATAAGGAAGGTTAAGG；和/或PCV2P：VIC-TTCTGGCCCTGCTCCCCAATCA-MG；和/或PPVF：ATGGAGTAGATGGTTAATAATGCAA；和/或PPVR：GTTTGTTTGTGAGTGTAGGTTAGTAGC；和/或PPVP：ROX-TACCCACTCACCATCCTCTGCTAATTC -BHQ2。

一种猪用疫苗中外源性病毒检测试剂在制备猪用疫苗中外源性病毒检测试剂盒中的应用。

一种猪用疫苗中外源性病毒检测试剂盒，包括权利要求1所述的一种猪用疫苗中外源性病毒检测试剂。

进一步的,反应体系为TaqMan Mixture（2×）12.5µL，BF/R0.15µL，PCF/R0.2µL、PPF/R0.1µL、BP1/2 0.08µL、PCP0.05µL、PPP0.08µL，模板5µL，用灭菌ddH2O补足至25µL。

优选的,体系中所用引物和探针的浓度均配成10 pmol/mL。