[发明专利]一种新型冠状病毒SARS-CoV-2的安全型复制子系统及其应用

权利要求书

1.一种新型冠状病毒SARS-CoV-2的复制子，包含以下内容的核酸序列：

(Ⅰ)编码新型冠状病毒SARS-CoV-2的非结构蛋白的核酸序列，所述编码新型冠状病毒SARS-CoV-2的非结构蛋白为新型冠状病毒SARS-CoV-2的nsp1～16蛋白，所述nsp1～16蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.1-16所示；

(Ⅱ)新型冠状病毒SARS-CoV-2的5’UTR、3’UTR、新型冠状病毒SARS-CoV-2的非结构蛋白可作用的转录调控区域和报告基因的核酸序列，所述转录调控区域选自新型冠状病毒SARS-CoV-2的M基因的转录调控区域。

2.根据权利要求1所述的复制子，其特征在于，所述转录调控区域位于报告基因的上游。

3.根据权利要求1所述的复制子，其特征在于，还包含作为参照的另一报告基因的核酸序列。

4.根据权利要求3所述的复制子，其特征在于，所述作为参照的另一报告基因连接有终止密码子且位于转录调控区域的上游。

5.根据权利要求1至4任一所述的复制子，其特征在于，所述核酸为DNA或RNA。

6.根据权利要求5所述的复制子，其特征在于，所述核酸为反义RNA。

7.一种新型冠状病毒SARS-CoV-2的复制子系统，包含插入有权利要求1至6任一所述的复制子的表达载体；所述表达载体为包括含有以下内容的两种表达载体：

(ⅰ)编码新型冠状病毒SARS-CoV-2的非结构蛋白的核酸序列，所述编码新型冠状病毒SARS-CoV-2的非结构蛋白为新型冠状病毒SARS-CoV-2的nsp1～16蛋白，所述nsp1～16蛋白的核苷酸序列如SEQ ID NO.1-16所示；

(ⅱ)新型冠状病毒SARS-CoV-2的5’UTR、3’UTR、新型冠状病毒SARS-CoV-2的非结构蛋白可作用的转录调控区域和报告基因的核酸序列，所述转录调控区域选自新型冠状病毒SARS-CoV-2的M基因的转录调控区域。

8.根据权利要求7所述的复制子系统，其特征在于，表达载体(ⅱ)中依次插入有新型冠状病毒SARS-CoV-2的5’UTR、新型冠状病毒SARS-CoV-2的非结构蛋白可作用的转录调控区域、报告基因、新型冠状病毒SARS-CoV-2的3’UTR的核酸序列。

9.根据权利要求8所述的复制子系统，其特征在于，表达载体(ⅱ)中依次插入有新型冠状病毒SARS-CoV-2的5’UTR、报告基因A、新型冠状病毒SARS-CoV-2的非结构蛋白可作用的转录调控区域、报告基因B、新型冠状病毒SARS-CoV-2的3’UTR的核酸序列，其中报告基因A与报告基因B不同。

10.根据权利要求9所述的复制子系统，其特征在于，新型冠状病毒SARS-CoV-2的5’UTR与报告基因A之间还连接有核糖体进入位点的核酸序列。

11.根据权利要求9所述的复制子系统，其特征在于，报告基因A为荧光蛋白的核酸序列；报告基因B为编码荧光素酶的核酸序列。

12.根据权利要求9至11任一所述的复制子系统，其特征在于，所述表达载体(ⅱ)中插入的核酸序列如SEQ ID No.28所示。

13.根据权利要求7所述的复制子系统，其特征在于，所述表达载体(ⅰ)中包括3个表达载体，分别插入有编码新型冠状病毒SARS-CoV-2的nsp1～16蛋白中的一个或多个的核酸序列。