[发明专利]一种眼底血管性疾病诊断环状RNA标志物、诊断试剂盒及应用

说明书

本发明属于生物医学检测技术领域，尤其涉及一种眼底血管性疾病诊断环状RNA标志物、诊断试剂盒及应用。本发明的试剂盒利用荧光定量PCR方法对患者血清中hsa_circ_0002484的表达水平进行检测，提供了一种眼底血管性疾病的检测标记物和预后评估方法，具有深远的临床意义和推广性，同时该方法具有创伤性小，操作方便等特点。

技术领域

本发明属于生物医学检测技术领域，尤其涉及一种眼底血管性疾病诊断环状RNA标志物、诊断试剂盒及应用。

背景技术

眼底血管性疾病包括增殖性糖尿病视网膜病变(PDR)、湿性年龄相关性黄斑变性(AMD)和早产儿视网膜病变(ROP)等。此类疾病已经成为从婴幼儿到老年人各个年龄阶段的视力障碍和致盲的最主要原因，严重影响了患者的生活质量。眼底血管新生是该类疾病的最重要的病理表现，其形成多认为是眼组织在缺血缺氧的病理状态下的适代偿性反应。眼底新生血管为异常血管，较正常血管通透性增加，易发生反复的渗液、出血和增殖，多累及黄斑和视盘，造成视力的严重损害甚至失明。目前，眼底血管性疾病的诊断主要依靠病史、形态学和功能学方面的综合检查，现有的检查手段仍具有一定的局限性，无法在疾病发展的早期阶段对该类疾病进行诊断。同时该类疾病相关的生化检查、血清学筛查和检测处于相对空白的状态。因此寻找一种具有高灵敏度和高特异性的标志物对眼底血管性疾病进行诊断和监控尤为重要。

环状RNA(circRNA)是一类具有特殊功能的非编码RNA，具有高稳定性和高保守性等特征。circRNA可以在转录后、翻译和表观遗传等层面发挥调控作用。circRNA参与细胞增殖、细胞分化、细胞周期和基因组印记等生理过程，通过多种分子机制调控基因表达，例如可以作为miRNA分子“海绵”、核转录调控因子和RNA结合蛋白。随着对circRNA结构和功能的认识，发现某些circRNA在肿瘤、心血管和神经系统等疾病中发挥重要的调控作用。鉴于circRNA的特征及其疾病相关性，其有望成为诊断标志物和预后评估的标记。

迄今为止，利用患者血清通过circRNA表达的检测对眼底血管疾病进行诊断的报道目前很少。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种眼底血管性疾病诊断环状RNA标志物、诊断试剂盒及应用，目的在于解决现有技术中的一部分问题或至少缓解现有技术中的一部分问题。

本发明是这样实现的，一种眼底血管性疾病诊断环状RNA标志物，所述标记物为circ_0002484，所述circ_0002484的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

进一步地，所述circ_0002484的检测引物如SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示。

一种眼底血管性疾病诊断实时荧光定量PCR检测试剂盒，包括PCR扩增体系，所述PCR扩增体系包括SYBR Premix Ex Taq 2×(包括Ex Taq酶，dNTP Mixture，Mg2+，TliRNaseH，TB Green)100μL，circ_0002484特异性的qRT-PCR上游引物，circ_0002484特异性的qRT-PCR下游引物，GAPDH定量PCR上游引物，GAPDH定量PCR下游引物；，引物各1管，10μM，100μL/管。

进一步地，所述circ_0002484的特异性qRT-PCR引物序列如上所示；所述GAPDH定量PCR上游引物序列如SEQ ID NO:2所示，下游引物序列如SEQ ID NO:3所示。

进一步地，所述试剂盒还包括反转录反应体系，所述反转录反应体系包括总RNA反转录引物(包括Oligo dT和Random 6mers)，1管，浓度：50μM，50μL/管，反转录酶(200U/μL)50μL，dNTP Mixture(10mM each)50μL，反转录buffer 50μL。