[发明专利]一种极低载量病原微生物的超灵敏定量PCR检测技术

权利要求书

1.一种极低载量病原微生物的超灵敏定量PCR检测技术，其包含以下步骤：

a.依据已公开的同一目的病原微生物基因序列，选取2个以上目标扩增区域序列，设计2对以上的特异性引物对和探针，所述探针为同一波长荧光基团标记，所述目标扩增区域序列为该病原微生物的特异性基因序列，且目标扩增区域序列不重叠；

b.采集样品，抽提核酸；

c.采用步骤a所述特异性引物对和探针，以上述样品核酸为模板，进行PCR扩增；

同时，模板可为样品采集液或样品采集裂解液。

2.如权利要求1所述的超灵敏定量PCR检测技术，其特征在于所述探针的5’端标记的荧光基团为FAM、HEX、CY5、TET、JOE、CY3、TAMRA、ROX中的一种。

3.如权利要求2所述的超灵敏定量PCR检测技术，其特征在于所述探针的所述探针的3’端标记的淬灭基团为BHQ1、BHQ2、BHQ3、Dabcyl中的任一种。

4.如权利要求1所述的超灵敏定量PCR检测技术，其特征在于所述病原微生物为寄生虫、真菌、细菌、螺旋体、支原体、立克次体、衣原体、或病毒。

5.如权利要求1所述的超灵敏定量PCR检测技术，其特征在于所述病原微生物为病毒。

6.如权利要求5所述的超灵敏定量PCR检测技术，其特征在于所述病毒为SRAS-CoV-2或AFSV。

7.如权利要求1所述的超灵敏定量PCR检测技术，其特征在于所述探针不为水解探针。

8.一种极低载量病原微生物的多重PCR试剂盒，所述试剂盒包含：

特异性扩增多种靶序列的2对以上引物对和探针，所述探针为同一荧光波长染料标记，每类引物对和探针可分别独立包装或混合包装；以及聚合酶链式反应其他试剂或成分和使用说明书。

9.如权利要求8所述的多重PCR试剂盒，其特征在于所述探针的5’端标记的荧光基团为FAM、HEX、CY5、TET、JOE、CY3、TAMRA、ROX中的一种；所述探针的3’端标记的淬灭基团为BHQ1、BHQ2、BHQ3、Dabcyl中的任一种。

10.如权利要求8所述的多重PCR试剂盒，其特征在于所述病原微生物为SRAS-CoV-2或AFSV。