[发明专利]与人FXYD2γa特异性结合的核酸适配体及其应用

说明书

本发明筛选得到两个与人FXYD2γa特异性结合的核酸适配体，分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。与FXYD2γa特异性抗体相比，本发明的核酸适配体具有筛选周期短，放大工艺简单，低成本，稳定易保存，可常温运输等优点。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别涉及与人FXYD2γa特异性结合的核酸适配体及其应用。

背景技术

糖尿病是一种由于胰岛素分泌缺陷或胰岛素作用障碍所致的以高血糖为特征的代谢性疾病。持续高血糖与长期代谢紊乱等可导致全身组织器官，特别是眼、肾、心血管及神经系统的损害及其功能障碍和衰竭。严重者可引起失水，电解质紊乱和酸碱平衡失调等急性并发症酮症酸中毒和高渗昏迷。糖尿病已成为威胁全球人类健康的最重要的非传染性疾病之一，糖尿病在发展中国家的快速增长，已给这些国家的社会和经济发展带来了沉重负担。

糖尿病主要分为1型糖尿病，2型糖尿病，妊娠糖尿病和其他类型的糖尿病。1型糖尿病和2型糖尿病的病因都是由于分泌胰岛素的胰岛β细胞数量减少。胰岛由β细胞、α细胞、δ细胞和PP细胞组成，这些细胞与其他胰岛内分泌细胞，包括腺泡细胞和胰腺导管细胞，都有着共同的起源。因此，寻找胰岛β细胞特异性生物标记物非常困难。

C肽是胰岛素产生过程中剪切下的一段31个氨基酸肽段，由于与胰岛素具有等摩尔关系，目前被广泛应用于糖尿病诊断和预测。但是C肽检测反映的是体内胰岛素的释放量，而不是体内胰岛β细胞的数量。已有越来越多的文献证明2型糖尿病患者胰岛β细胞更多地处于去分化状态，即β细胞仍然存在，但是丧失了分泌胰岛素的能力。因此，迫切需要寻找人胰岛β细胞特异性生物标记物，以更好地鉴别糖尿病患者体内是否仍然存在β细胞，以期通过唤醒去分化的β细胞更好地治疗患者。另外，胰岛移植后需数天才能检测到C肽和知晓移植是否成功，也迫切需要开发新的方法以更早地监控移植β细胞的状况，提高移植成功率。

基因FXYD2γ编码Na⁺-K⁺-ATP酶的调节亚基，在人体中有3个异构体：FX YD2γa，FXYD2γb和FXYD2γc。有多篇文献表明其中的FXYD2γa异构体只在人胰岛β细胞中表达。FXYD2γa最早在人胚胎15周即出现在β细胞中，与表达生长抑素的δ细胞、表达胰多肽的PP细胞无共定位，并且在人体内其他器官或细胞中表达量很低。1型糖尿病患者β细胞被自身免疫攻击破坏，数量减少。在这些患者血清中FXYD2γa相应也很低。比利时鲁汶大学的Decio L.Eizirik教授发现在胰岛移植中，核素偶联的FXYD2γa抗体能更好地监测移植β细胞的存活。因此，与目前广泛使用的C肽水平相比，通过检测FXYD2γa的水平可以更好地反映人体或移植后β细胞的数量。

已有的检测FXYD2γa的探针为抗体或其衍生物，但是抗体不稳定、容易产生不可逆变性，批间差异大，生产时间长和成本高，因此，需要开发一种新的检测FXYD2γa的探针。

发明内容

本发明的主要目的是提供两个与人胰岛β细胞的特异性标记物FXYD2γa特异性结合的核酸适配体，旨在通过该核酸适配体进一步开发检测人胰岛β细胞的试剂盒，从而为预测和诊断糖尿病及追踪胰岛移植治疗效果提供工具，并且核酸适配体具有筛选时间短，批间差异小，稳定等优点。

为实现上述目的，本发明第一方面提出两个与人FXYD2γa特异性结合的核酸适配体，所述核酸适配体的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。

本发明第二方面提出第一方面所述的核酸适配体在制备FXYD2γa检测试剂、试剂盒或传感器中的应用。

本发明第三方面提出一种用于检测胰岛β细胞的探针，包括第一方面所述的与FXYD2γa特异性结合的核酸适配体。

可选地，所述核酸适配体的5’端或3’端标记荧光基团、生物素基团或放射性核素。