[发明专利]一种生态微生物菌剂的制备工艺在审

专利信息
申请号: 202010822475.4 申请日: 2020-08-14
公开(公告)号: CN111876362A 公开(公告)日: 2020-11-03
发明(设计)人: 张雅萍 申请(专利权)人: 浙江九田环保科技有限公司
主分类号: C12N1/20 分类号: C12N1/20;C12Q1/689;C12Q1/6806
代理公司: 北京方圆嘉禾知识产权代理有限公司 11385 代理人: 陈明辉
地址: 313100 浙*** 国省代码: 浙江;33
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摘要:
搜索关键词: 一种 生态 微生物 制备 工艺
【权利要求书】:

1.一种生态微生物菌剂的制备工艺,其特征在于:其中微生物菌剂的制作方法包括有以下步骤:

步骤一:原料处理,将各种中草药进行筛选,选取表皮完好的中草药,并截取其中等大部分的草药段;

步骤二:制备细菌菌群溶液载体,微生物的种类高达122种,可同时含有厌氧菌、好氧菌和兼性菌,利用细菌菌群溶液载体让这122种细菌可以在在同一环境下共存;

步骤三:DNA分析,将步骤一中的草药段放置在分析仪中,利用计算机模型对数种中草药进行DNA分析;

步骤四:原位细胞裂解,使得中草药中提取的DNA更具代表性,必须保证样品中所有的微生物细胞裂解放出核酸,在此过程中主要运用到了以下两种方法:

方法一:采用冻融+玻璃珠+溶菌酶+sds的组合方法,以此来促进中草药中的DNA进行PCR扩增;

方法二:使用液氮冻融以及玻璃珠振荡法代替传统液氮研磨技术;

步骤五:DNA纯化,本产品主要结合了两种方法尽可能多地去除粗提的DNA中的污染物,经过以上步骤之后,进行稀释即可部分被限制性酶切和扩增;

步骤六:从样本中提取微生物DNA,将提取后的DNA放置在细菌菌群溶液载体中;

步骤六:将存放于载体中的菌剂置于无菌环境中,观察一个月时间,对内部的成分进行检测。

2.根据权利要求1所述的一种生态微生物菌剂的制备工艺,其特征在于:所述步骤二中,细菌培养特定溶液载体的溶液主要来自于新鲜中草药的细胞液,主要提取艾草、蒲公英以及鱼腥草植物内的中草药细胞液;再取适量份的樟木粉、竹炭粉、蒸馏水与细胞液进行均匀混合,将液体培养液利用离心机作离心处理,将多余的杂质去除,保留单纯的液体培养液,再将单纯的液体培养液利用冰柜作冷冻处理,冷冻温度保持在-80~-50摄氏度的范围之内,冷冻72小时,使用时提前取出经处理后与微生物进行配比。

3.根据权利要求1所述的一种生态微生物菌剂的制备工艺,其特征在于:所述步骤三中,结合结构生物学对DNA高级结构的预测分析,运用计算机模型对各个细菌DNA的功能区序列进行设计和优化密码子,从而得到能够高效表达出目标细菌功能的基因序列,再将上述目标序列连接到合适的表达载体上,然后利用氯化铯密度梯度超速离心纯化,从样本中提取微生物DNA,从而以基因组的多样性反映物种的多样性。

4.根据权利要求1所述的一种生态微生物菌剂的制备工艺,其特征在于:所述步骤四中,其中的溶菌酶通过破坏中草药的细胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡糖之间的β-1,4糖苷键,使细胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽,导致细胞壁破裂内容物逸出而使细菌溶解。

5.根据权利要求1所述的一种生态微生物菌剂的制备工艺,其特征在于:所述步骤五中,在DNA纯化的过程中,需要使用到氯化铯密度梯度超速离心纯化含有DNA的溶液,随即利用醋酸甲进行沉淀一段时间,温度保持在室温状况下。

6.根据权利要求5所述的一种生态微生物菌剂的制备工艺,其特征在于:所述醋酸甲的浓度保持在0.05-0.1g/L,其中的醋酸甲在释放的过程中,定时释放,且定量释放。

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