[发明专利]一种生态微生物菌剂的制备工艺

权利要求书

1.一种生态微生物菌剂的制备工艺，其特征在于：其中微生物菌剂的制作方法包括有以下步骤：

步骤一：原料处理，将各种中草药进行筛选，选取表皮完好的中草药，并截取其中等大部分的草药段；

步骤二：制备细菌菌群溶液载体，微生物的种类高达122种，可同时含有厌氧菌、好氧菌和兼性菌，利用细菌菌群溶液载体让这122种细菌可以在在同一环境下共存；

步骤三：DNA分析，将步骤一中的草药段放置在分析仪中，利用计算机模型对数种中草药进行DNA分析；

步骤四：原位细胞裂解，使得中草药中提取的DNA更具代表性，必须保证样品中所有的微生物细胞裂解放出核酸，在此过程中主要运用到了以下两种方法：

方法一：采用冻融+玻璃珠+溶菌酶+sds的组合方法，以此来促进中草药中的DNA进行PCR扩增；

方法二：使用液氮冻融以及玻璃珠振荡法代替传统液氮研磨技术；

步骤五：DNA纯化，本产品主要结合了两种方法尽可能多地去除粗提的DNA中的污染物，经过以上步骤之后，进行稀释即可部分被限制性酶切和扩增；

步骤六：从样本中提取微生物DNA，将提取后的DNA放置在细菌菌群溶液载体中；

步骤六：将存放于载体中的菌剂置于无菌环境中，观察一个月时间，对内部的成分进行检测。

2.根据权利要求1所述的一种生态微生物菌剂的制备工艺，其特征在于：所述步骤二中，细菌培养特定溶液载体的溶液主要来自于新鲜中草药的细胞液，主要提取艾草、蒲公英以及鱼腥草植物内的中草药细胞液；再取适量份的樟木粉、竹炭粉、蒸馏水与细胞液进行均匀混合，将液体培养液利用离心机作离心处理，将多余的杂质去除，保留单纯的液体培养液，再将单纯的液体培养液利用冰柜作冷冻处理，冷冻温度保持在-80～-50摄氏度的范围之内，冷冻72小时，使用时提前取出经处理后与微生物进行配比。

3.根据权利要求1所述的一种生态微生物菌剂的制备工艺，其特征在于：所述步骤三中，结合结构生物学对DNA高级结构的预测分析，运用计算机模型对各个细菌DNA的功能区序列进行设计和优化密码子，从而得到能够高效表达出目标细菌功能的基因序列，再将上述目标序列连接到合适的表达载体上，然后利用氯化铯密度梯度超速离心纯化，从样本中提取微生物DNA，从而以基因组的多样性反映物种的多样性。

4.根据权利要求1所述的一种生态微生物菌剂的制备工艺，其特征在于：所述步骤四中，其中的溶菌酶通过破坏中草药的细胞壁中的N-乙酰胞壁酸和N-乙酰氨基葡糖之间的β-1,4糖苷键，使细胞壁不溶性黏多糖分解成可溶性糖肽，导致细胞壁破裂内容物逸出而使细菌溶解。

5.根据权利要求1所述的一种生态微生物菌剂的制备工艺，其特征在于：所述步骤五中，在DNA纯化的过程中，需要使用到氯化铯密度梯度超速离心纯化含有DNA的溶液，随即利用醋酸甲进行沉淀一段时间，温度保持在室温状况下。

6.根据权利要求5所述的一种生态微生物菌剂的制备工艺，其特征在于：所述醋酸甲的浓度保持在0.05-0.1g/L，其中的醋酸甲在释放的过程中，定时释放，且定量释放。