[发明专利]一种六氟双酚AF污染的秀丽线虫模型的构建方法及其检测方法

说明书

本发明提供了一种六氟双酚AF污染的秀丽线虫模型的构建方法及其检测方法，属于食品安全检测技术领域。双酚AF污染的秀丽线虫模型的构建方法，将含0～100μM梯度浓度的双酚AF和体积浓度0.1％的乙醇的M9缓冲溶液与大肠杆菌菌液等体积混合，分别取50μL梯度混合液涂布在NGM固体培养基上，将L1期的秀丽线虫幼虫重悬后涂布在每个梯度的上述培养基上培养至L4期，得到秀丽线虫模型。通过检测，结果表明日常生活中能接触的低浓度双酚AF可以减弱线虫的运动行为，减少子代数量，对线虫的生长发育有抑制，对生殖能力造成损伤，还能引起不同程度的氧化损伤。因此，在环境中低浓度的双酚AF的暴露对秀丽线虫存在负面影响。

技术领域

本发明属于食品安全检测技术领域，具体涉及一种六氟双酚AF污染的秀丽线虫模型的构建方法及其检测方法。

背景技术

六氟双酚AF(bisphenol AF，BPAF)简称为双酚AF，不是自然界中天然存在的物质，而是人类用于生产与加工合成的一种新型的含氟双酚类物质，进而逐步释放到环境中。BPAF是在工业上的应用相当广泛。BPAF作为主要的含氟中间体被用于聚碳酸酯塑料和环氧树脂的生产，也作为抗氧化剂用于制造聚氯乙烯塑料，用于制造高温复合材料、电子器件、可透气性渗透膜等酯类，也可应用于塑料光纤和导波管的制造、食品包装材料、医疗用具等领域。一旦产品老化或直接释放BPAF，BPAF就会通过环境进行传播。由于大量生产和广泛的应用，生态环境中双酚AF的含量越来越高。在生产和使用双酚AF的时候，有大量双酚AF通过各种途径释放到大气、土壤、水域中，通过食物网的传播和富集，导致生物体内的双酚AF含量增加。

双酚AF作为双酚A的代替物出现在人们生活当中，由于双酚A目前已经被限制使用在食品包装材料和一些日常用品当中，由此导致双酚AF的使用量在逐年增加。双酚AF的化学性质稳定，蓄积性较强，人们已经在土壤、水体、积淀物中检测出BPAF，甚至在生物体内也检测到了BPAF的存在。有研究表明，双酚AF对KNG细胞产生的毒性不亚于双酚A，并且认为双酚A和双酚AF在调节颗粒细胞生物学功能和卵巢卵泡发育过程中发挥不同的作用。因此，双酚AF对环境和生物的影响急需引起重视。有医学研究发现，癌症、动脉粥样硬化、神经行为障碍、心脑血管疾病等都与双酚AF有关。也有研究证明，双酚AF在环境基质和食品容器中被检测出来，甚至在生物体内也检测到了双酚AF的存在，双酚AF对环境和生物的影响急需引起重视，尤其是低浓度的双酚AF的暴露。

秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans，C.elegans)在科学研究中有许多优点，主要体现在生命周期短、基因组完整、发育定型、繁殖简单、体型小，成本低廉。作为最被普遍使用的模式生物，在生命科学及医学的发展中起着至关重要的作用。秀丽线虫的解剖结构简单，但它可以表现出大量的生物行为，包括运动、觅食、喂食、排便、产卵、幼虫形成、触觉、嗅觉、味觉和温度，以及一些复杂的行为，如雄性交配、社会行为、学习和记忆。这些优势让秀丽线虫逐渐发展成为环境毒理学、生物医学等各领域中的重要模式生物。秀丽隐杆线虫是第一个基因组完全测序的多细胞生物，目前该模型已被广泛用于评估遗传、发育和神经系统等方面。

目前，关于双酚AF的研究，主要是通过体内试验和体外试验来进行的，对体内试验来说，受试对象主要集中于小鼠、大鼠和部分鱼类等，对受试生物进行染毒，研究双酚AF对受试生物神经行为、运动行为、各种器官和生殖等的毒性效应，研究表明，双酚AF在肝脏、肾脏和脂肪组织中的含量最高。对于体外试验，受试对象主要是离体细胞，包括人体红细胞、人乳腺癌细胞等。Jie Gu等人研究表明双酚AF对斑马鱼和人体心肌细胞能够诱导的产生心脏毒性；BPAF引起睾丸形态的改变，并且也会抑制睾丸的分化和后续发育，并有一定程度的雌性化作用，Man Cai等人认为BPAF对包括人类在内的脊椎动物的男性生殖系统存在潜在的风险；Di Wu等人的通过对小鼠进行研究，BPAF能够显著损害了血睾丸屏障的完整性和降低精子数量和质量，并严重损害小鼠精子DNA，且呈剂量依赖性，这些也说明了双酚AF对男性生育能力存在有害作用。