[发明专利]一株产抗菌肽的海洋芽孢杆菌及其发酵方法和应用

权利要求书

1.一株产抗菌肽的海洋芽孢杆菌，其特征在于，该海洋芽孢杆菌是从采自于威海市南海新区某养殖池的底泥样品中分离、纯化得到的枯草芽孢杆菌M252，其对溶藻弧菌、金黄色葡萄球菌、嗜水气单胞菌和大肠杆菌均具有明显的抑制效果，保藏编号为CCTCC NO：M2020057，保藏日期为2020 年03月24日，保藏单位为中国典型培养物保藏中心，保藏地址为中国武汉。

2.权利要求1所述的产抗菌肽的海洋芽孢杆菌的发酵方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1：将枯草芽孢杆菌M252纯化后接入一级种子罐中，一级种子罐中的培养基的配方为：蛋白胨10g/L、酵母膏5g/L、氯化钠1g/L、用净化的海水配制，35℃、200rpm培养40h，得一级种子液；

步骤2：将一级种子液接入二级种子罐中，二级种子罐中的培养基的配方为：葡萄糖40g/L、酵母膏10g/L、玉米浆5g/L、硫酸铵1g/L、硫酸镁0.5g/L、磷酸二氢钾1.5g/L、氯化钙1g/L、用净化的海水配制，35℃、300rpm培养20h，得二级种子液；

步骤3：将二级种子液接入固体发酵罐中，固体发酵罐中的培养基的配方为：氯化钠5g/kg、磷酸二氢钾2g/kg、硫酸铵2g/kg、余量为麸皮、米糠或豆粕、含水量控制在20-40%，控制湿度30%，35℃、8rpm培养56h，然后低温鼓风干燥，得抗菌肽固剂。

3.采用权利要求2所述的发酵方法发酵得到的抗菌肽固剂的应用，其特征在于，作为饲料添加剂使用。

4.权利要求1所述的产抗菌肽的海洋芽孢杆菌的发酵方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1：将枯草芽孢杆菌M252纯化后接入一级种子罐中，一级种子罐中的培养基的配方为：蛋白胨10g/L、酵母膏5g/L、氯化钠1g/L、用净化的海水配制，35℃、200rpm培养40h，得一级种子液；

步骤2：将一级种子液接入二级种子罐中，二级种子罐中的培养基的配方为：葡萄糖40g/L、酵母膏10g/L、玉米浆5g/L、硫酸铵1g/L、硫酸镁0.5g/L、磷酸二氢钾1.5g/L、氯化钙1g/L、用净化的海水配制，35℃、300rpm培养20h，得二级种子液；

步骤3：将二级种子液接入液体发酵罐中，液体发酵罐中的培养基的配方为：氯化铵1g/L、醋酸钠3g/L、氯化镁0.2g/L、氯化钙0.2g/L、磷酸二氢钾0.6g/L、氯化钠1g/L、酵母膏2g/L、葡萄糖2g/L、用净化的海水配制，设置温度35℃、转速400rpm、通风量0.75vvm、DO值25%，控制发酵液pH 7-8，手动添加消泡剂，发酵56h，得发酵液，将发酵液于4℃、4000rpm离心，将所得上清液用旋转蒸发仪浓缩10倍，浓缩液通过 0.22μm 滤膜除去菌体及沉淀物，得抗菌肽液剂；

或者，将二级种子液接入固体发酵罐中，固体发酵罐中的培养基的配方为：氯化钠5g/kg、磷酸二氢钾2g/kg、硫酸铵2g/kg、余量为麸皮、米糠或豆粕、含水量控制在20-40%，控制湿度30%，35℃、8rpm培养56h，然后低温鼓风干燥，得抗菌肽固剂，之后向抗菌肽固剂中按重量比10：1加入无菌净化水，180rpm浸提2h，浸提液离心浓缩、0.22μm滤膜除菌，得抗菌肽液剂。

5.采用权利要求4所述的发酵方法发酵得到的抗菌肽液剂的应用，其特征在于，作为对虾、水产鱼类养殖的功能肥料使用，直接投施至养殖池塘中。