[发明专利]一组鳜鲈弹状病毒的LAMP检测引物组及其应用、一种检测试剂盒

说明书

本发明公开了一组鳜鲈弹状病毒的LAMP检测引物组及其应用、一种检测试剂盒，引物组包括一对外引物、一对内引物和一对环引物；外引物包括L‑F3序列和L‑B3序列，外引物L‑F3序列如SEQ ID NO:1所示，外引物L‑B3序列如SEQ ID NO:2所示；内引物包括L‑FIP序列和L‑BIP序列，内引物L‑FIP序列如SEQ ID NO:3所示，内引物L‑BIP序列如SEQ ID NO:4所示；环引物包括L‑LF序列和L‑LB序列，环引物L‑LF序列如SEQ ID NO:5所示，环引物L‑LB序列如SEQ ID NO:6所示。并提供该引物组在制备鳜鲈弹状病毒检测试剂盒中的应用及试剂盒。本发明的引物组和试剂盒具有操作简单、检测快速、特异性好、灵敏度高和结果可靠等优点。

技术领域

本发明涉及一组LAMP检测引物组及其应用、一种检测试剂盒，尤其涉及一组鳜鲈弹状病毒的LAMP检测引物组及其应用、一种检测试剂盒。

背景技术

弹状病毒(Rhabdovirus)是一类有囊膜的负链RNA病毒，具有较强的致病性且宿主范围广泛，可感染包括哺乳动物、鸟类、爬行动物、鱼类、昆虫以及植物等在内多种生物。鱼类弹状病毒是硬骨鱼类病毒中数量最多的群体之一，到目前为止已经分离鉴定近二十种鱼类弹状病毒，如：鳜鱼弹状病毒(Siniperca chuatsi rhabdovirus,SCRV)、加州鲈弹状病毒(Micropterus salmoides rhabdovirus,MSRV)，而它们通常与水产养殖的流行病及重大经济损失有关。

鳜(翘嘴鳜)和鲈(加州鲈)是重要的淡水名特优养殖品种，它们肉质细嫩，味道鲜美，蛋白质含量高而深受广大消费者的青睐。但由于养殖规模的扩大及养殖密度的提高，加之水环境的污染，病害问题日益凸显出来。弹状病毒病是鳜、鲈养殖过程中常见几种病毒性疾病之一，主要危害养殖鳜鲈幼鱼，鱼苗的死亡率可达30％～50％；近几年也屡有发现对鱼种也能导致发病且出现大批量死亡，给鳜鲈养殖经济带来严重损失。研究发现，鳜鱼弹状病毒SCRV和加州鲈弹状病毒MSRV有较近的亲缘关系，在序列同源性上高达96％以上。

目前，对鳜鱼和加州鲈鲈弹状病毒的检测方法主要依赖于传统的PCR方法，此方法虽然能提供准确可靠的检测结果，但需要昂贵的仪器设备、较高检测费用以及对检测人员较高的技术要求而使其不适用于鳜鱼和鲈鱼养殖现场的大规模筛选使用和推广。

发明内容

发明目的：本发明的第一目的为提供一组快速、特异检测L基因的存在的鳜鲈弹状病毒的LAMP检测引物组，本发明的第二目的为提供该LAMP检测引物组在制备鳜鲈弹状病毒检测试剂盒中的应用，本发明的第三目的为提供一种鳜鲈弹状病毒的检测试剂盒。

技术方案：本发明的鳜鲈弹状病毒的LAMP检测引物组，引物组包括一对外引物、一对内引物和一对环引物；

外引物包括L-F3序列和L-B3序列，外引物L-F3序列如SEQ ID NO:1所示，外引物L-B3序列如SEQ ID NO:2所示；

内引物包括L-FIP序列和L-BIP序列，内引物L-FIP序列如SEQ ID NO:3所示，内引物L-BIP序列如SEQ ID NO:4所示；

环引物包括L-LF序列和L-LB序列，环引物L-LF序列如SEQ ID NO:5所示，环引物L-LB序列如SEQ ID NO:6所示。

进一步地，外引物、内引物与环引物的摩尔比为0.8～1.2:6～9:3～5。

本发明的鳜鲈弹状病毒的LAMP检测引物组在制备鳜鲈弹状病毒检测试剂盒中的应用。

本发明的鳜鲈弹状病毒的检测试剂盒，试剂盒包括引物组。

优选的，试剂盒还包括逆转录酶、DNA聚合酶、LAMP反应液、阳性对照品、阴性对照品和显色剂。DNA聚合酶为Bst DNA聚合酶。