[发明专利]检测产毒艰难梭菌的多重荧光定量PCR引物、探针和试剂盒

权利要求书

1.用于产毒艰难梭菌的多重荧光定量PCR检测的引物探针组，其特征在于，包含3对特异性引物和3条特异性探针；所述特异性引物的序列如SEQ ID NO.1-6所示，所述特异性探针的序列如SEQ ID NO.7-9所示。

2.根据权利要求1所述的引物探针组，其特征在于，所述特异性探针的5’端标记的荧光基团为选自FAM、VIC、HEX、CY5、TET、JOE、CY3、TAMRA、ROX中的任一种，3’端标记的淬灭基团为选自BHQ1、BHQ2、BHQ3、Dabcyl中的任一种。

3.根据权利要求1或2所述的引物探针组，其特征在于，SEQ ID NO.7所示的特异性探针的5’端标记的荧光基团为FAM，SEQ ID NO.8所示的特异性探针的5’端标记的荧光基团为VIC，SEQ ID NO.9所示的特异性探针的5’端标记的荧光基团为CY5，所述特异性探针的3’端标记的淬灭基团均为BHQ1。

4.权利要求1～3任一项所述的引物探针组在制备用于产毒艰难梭菌检测的试剂盒中的应用。

5.用于产毒艰难梭菌检测的试剂盒，其特征在于，包含权利要求1～3任一项所述的引物探针组。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包含荧光定量PCR反应液、阳性对照和阴性对照中的一种或多种。

7.根据权利要求5或6所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒在工作时的荧光定量PCR反应程序如下：95℃、20s；95℃、3s，58℃、30s，40个循环。

8.根据权利要求5～7任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒在工作时的荧光定量PCR反应体系中正向或反向引物与探针的摩尔比为1:2；

优选地，荧光定量PCR的20μL反应体系包括如下组分：2×荧光定量PCR反应液10μL，10μM正向引物0.4μL，10μM反向引物0.4μL，10μM探针0.8μL，DNA模板2μL。

9.一种产毒艰难梭菌的多重荧光定量PCR检测方法，其特征在于，以艰难梭菌基因组DNA为模板，利用权利要求1～3任一项所述的引物探针组或权利要求5～8任一项所述的试剂盒进行多重荧光定量PCR，根据扩增曲线和/或CT值判断检测结果。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述荧光定量PCR的反应程序如下：95℃、20s；95℃、3s，58℃、30s，40个循环；

所述荧光定量PCR的反应体系包括如下组分：2×荧光定量PCR反应液10μL，10μM上游引物0.4μL，10μM下游引物0.4μL，10μM探针0.8μL，DNA模板2μL。