[发明专利]一种动脉粥样硬化防治药物筛选细胞模型及其构建和应用

说明书

本发明公开了一种动脉粥样硬化防治药物筛选细胞模型的构建方法，包括：制备CVF；将CVF用生理盐水稀释后与NHP等体积混匀，于恒温水浴一段时候后得到CAC；细胞培养：将人血管平滑肌细胞株用含15％FBS的DMEM高糖培养基，于37℃、含5％CO₂细胞培养箱中培养；将对数生长期的VSMC稀释后接种，一段时间后进行换液处理，加入CAC，反应一段时间后即得到所述细胞模型；本发明还公开了使用该构建方法得到的细胞模型；本发明还公开了该细胞模型在筛选动脉粥样硬化防治药物中的应用。本发明利用CVF来特异激活血浆补体旁路途径，构建补体旁路途径激活诱导的VSMC增殖活化模型，为开展AS防治药物的筛选提供了一个新颖的细胞模型。

技术领域

本发明涉及动脉粥样硬化细胞模型技术领域，尤其涉及一种动脉粥样硬化防治药物筛选细胞模型及其构建和应用。

背景技术

随着经济社会的发展和人类生活条件的不断改善，心血管系统疾病的发病率和死亡率日趋增高，且呈现年轻化趋势。动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)是一种常见高发的慢性的心血管炎症性疾病，是引起心脑血管疾病死亡的主要原因之一。血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells，VSMC)是血管壁的重要组成部分，VSMC的异常增殖和迁移在AS病变的发病机制中扮演了关键角色。多种致病因素导致的VSMC活化和功能紊乱是炎症发展的重要环节，能诱导VSMC产生炎性细胞因子进一步加重炎性反应，在AS发生和发展过程中起关键作用。多种因素都会导致VSMC增殖活化，例如脂多糖和氧化低密度脂蛋白等,既往的研究多关注于氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的VSMC增殖活化和损伤，在相应的细胞水平上的药物筛选中也都是基于该原理构建VSMC增殖活化抑制的筛选模型。

目前常用的ox-LDL损伤血管平滑肌细胞方法的缺点在于：

ox-LDL在AS的发病机制中扮演了重要角色，其公认的机制在于：ox-LDL引起内皮细胞氧化应激损伤和功能失调，从而引发炎症，释放的炎症介质及炎性细胞的浸润激活和损伤VSMC，在这一病理过程中，伴随有巨噬细胞和VSMC形成泡沫细胞，继而引起VSMC的活化、钙化、损伤及凋亡，逐渐形成粥样斑块。因此，ox-LDL直接刺激血管平滑肌细胞增殖活化与AS的发病机制有较大的差异，作为筛选模型，并不能较好反映AS的发病机制。

发明内容

为了解决上述相关领域中的不足，本发明提供一种动脉粥样硬化防治药物筛选细胞模型及其构建和应用。

本发明的一种动脉粥样硬化防治药物筛选细胞模型及其构建和应用是通过以下技术方案实现的：

一种动脉粥样硬化防治药物筛选细胞模型的构建方法，包括以下步骤：

步骤1，制备眼镜蛇毒因子CVF；

步骤2，将制得的眼镜蛇毒因子CVF用生理盐水稀释后与NHP等体积混匀，于恒温水浴一段时候后得到补体旁路途径激活产物CAC；

步骤3，细胞培养：将人血管平滑肌细胞株VSMC用含15％FBS的DMEM高糖培养基，于37℃、含5％CO₂细胞培养箱中培养；

步骤4，将步骤3所培养的对数生长期的人血管平滑肌细胞VSMC稀释后接种，一段时间后进行换液处理，加入步骤2所得的补体旁路途径激活产物CAC，反应一段时间后即得到所述用于筛选动脉粥样硬化防治药物的细胞模型。

进一步地，步骤2中所述眼镜蛇毒因子CVF稀释后的浓度为6.5×10⁴U·L^-1。

进一步地，步骤4中所述补体旁路途径激活产物CAC与所述人血管平滑肌细胞VSMC稀释后的用量比为30～50μL/孔：100μL/孔。

进一步地，步骤4中所述人血管平滑肌细胞液稀释后的浓度为7.5×10⁴个/mL。