[发明专利]CD29抗体在鉴定、分选人胎盘平滑绒毛膜源间充质干细胞中的应用

权利要求书

1.CD29在鉴定、分选人胎盘平滑绒毛膜源间充质干细胞中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，包括以下步骤：

S1：从人胎盘组织中分离并培养干细胞，将分离培养后的干细胞收集冻存，置于梯度冻存盒中，并于-80℃下降温24h后转入液氮中保存；

S2：复苏一批上述冻存的干细胞，使细胞数量不低于2×10⁶个，离心清洗后分别使用CD11b、CD19、CD34、CD45、HLA-DR、CD29、CD73、CD105抗体进行标记，并用PBS重悬到400μl，对重悬后的细胞用流式细胞仪进行检测；挑选CD29、CD105、CD73表达量≥95％，且CD45、CD34、CD11b、CD19、HLA-DR表达量≤2％的干细胞，即为人胎盘平滑绒毛膜源间充质干细胞。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，人胎盘干细胞的分离包括以下步骤：

SS1：取健康足月的胎盘，剪取胎盘边缘的胎膜组织，清洗后剥取平滑绒毛膜组织，剔除残留血管；

SS2：将SS1得到的平滑绒毛膜组织剪成1mm³～3mm³的组织块，加入组织清洗液，于700×g下离心清洗5min；

SS3：向清洗后的平滑绒毛膜组织中加入无血清培养基进行重悬，然后按6mg/cm²的接种密度接种至培养瓶，培养基体积与接种面积比为1:16，在37℃、5％CO₂以及饱和湿度条件下进行培养；培养过程中每隔3～4天更换一次培养基，直至P0代细胞融合度达到45％或非P0代细胞融合度达到80％；

SS4：向培养瓶中加入0.25％胰蛋白酶，对SS3所得细胞进行消化，接着用无血清培养基终止消化，消化完成后，将组织细胞悬液过100μm孔径的筛网去除组织，在细胞悬液中加入0.9％氯化钠注射液进行稀释，500×g，离心清洗3min，然后加入无血清培养基重悬，调整密度为0.8×10⁴～1.4×10⁴个/cm²，接种至培养瓶中进行传代培养；

SS5：待传代后的细胞融合度达到85％时，加入0.25％胰蛋白酶对细胞进行消化，收集细胞，加入0.9％氯化钠注射液进行稀释，500×g，离心清洗3min，然后将预冷的细胞冻存液加入细胞中，重悬细胞使细胞密度为2×10⁶个/mL，然后以1mL/支分装至冻存管中，放入梯度冻存盒，先在-80℃降温24h后再转入气相液氮罐中保存，即得。

4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：鉴定、分选的人胎盘平滑绒毛膜源间充质干细胞的代次为P0～P3代。