[发明专利]一株高地芽孢杆菌及其活性物质复配液与菌剂在防治根结线虫病中的应用

权利要求书

1.一种高地芽孢杆菌（Bacillus altitudinis）AMCC 101084，已于2018年8月16日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号），保藏编号为CGMCC No.16308。

2.权利要求1所述高地芽孢杆菌AMCC 101084的培养方法I，其特征在于，包括如下步骤：

（1）将高地芽孢杆菌AMCC 101084在固体培养基平板上活化培养，制得活化菌株；

（2）将步骤（1）制得的活化菌株接种于种子液体培养基中，进行培养，制得种子液；

（3）将步骤（2）制得的种子液接种于发酵液体培养基中，进行培养，制得初级发酵液；

（4）将步骤（3）制得的初级发酵液接种于发酵液体培养基中，进行培养，制得发酵液。

3.如权利要求2所述的培养方法Ⅰ，其特征在于，步骤（1）中，固体培养基为LB固体培养基，活化条件为37℃活化培养24h。

4.如权利要求2所述的培养方法Ⅰ，其特征在于，步骤（2）中，种子液体培养基为LB液体培养基，培养条件为37℃、180rpm培养18h。

5.如权利要求2所述的培养方法Ⅰ，其特征在于，步骤（3）中，按体积百分比5-10％的接种量接种，培养条件为37℃、180rpm培养10h。

6.如权利要求2所述的培养方法Ⅰ，其特征在于，步骤（4）中，按体积百分比5-10％的接种量接种，培养条件为37℃、180rpm培养24h。

7.如权利要求2所述的培养方法Ⅰ，其特征在于，步骤（3）或（4）中，所述发酵液体培养基的组分按质量分数计为：玉米粉1.5%，豆饼粉2.0%，麸皮2.1%， KH₂PO₄ 0.03%，K₂HPO₄0.01%，CaCl₂ 0.01%，余量水，pH 7.0-7.2。

8.如权利要求2所述的培养方法Ⅰ，其特征在于，步骤（4）中，制得发酵液的菌体浓度为（0.2~1.0）×10⁹CFU/mL。

9.权利要求1所述高地芽孢杆菌AMCC 101084的培养方法Ⅱ，其特征在于，包括如下步骤：

a将高地芽孢杆菌AMCC 101084在LB固体培养基平板上活化培养，制得活化菌株；

b将步骤a制得的活化菌株接种于BPY液体培养基中，进行培养，制得种子液；

c将步骤b制得的种子液接种于BPY液体培养基中，进行培养，制得发酵液。

10.如权利要求9所述的培养方法Ⅱ，其特征在于，步骤a中，活化条件为37℃活化培养12h。

11.如权利要求9所述的培养方法Ⅱ，其特征在于，步骤b中，培养条件为37℃、200rpm培养12h。

12.如权利要求9所述的培养方法Ⅱ，其特征在于，步骤c中，接种量为1%，培养条件为37℃、200rpm培养48h。

13.如权利要求9所述的培养方法Ⅱ，其特征在于，步骤b或步骤c中，所述BPY液体培养基每升组分如下：

蛋白胨10.0g，酵母膏5.0g，牛肉膏5.0g，葡萄糖10.0g，氯化钠5.0g，余量水，pH 7.0。

14.如权利要求9所述的培养方法Ⅱ，其特征在于，步骤c中，制得发酵液的菌体浓度为（0.3~1.1）×10⁸CFU/mL。