[发明专利]一种快速提取荞麦叶片基因组DNA的方法

说明书

本发明公开了一种快速提取荞麦叶片基因组DNA的方法，包括：将荞麦叶片和玻璃珠装入离心管中，将离心管放入泡沫箱中；在泡沫箱中倒入液氮，覆盖所有离心管，将泡沫箱密封后摇晃，使内部叶片粉末化；向离心管中加入提取液，使提取液和叶片粉末完全混合、温浴，后加入等体积的酚氯仿异戊醇，混匀后离心，所述提取液成分包括：乙二胺四乙酸(EDTA)、十二烷基磺酸钠(SDS)、氯化钠(NaCl)和三羟甲基氨基甲烷(Tris)；离心后取上清于新的离心管中，加入等体积的预冷异丙醇，混匀、冷浴；将上述混匀液离心，弃上清；加入乙醇清洗，离心后弃上清液；向离心管中加ddH₂O溶解，即可。该方法所需时间短、成本低、高效。

技术领域

本发明涉及DNA的提取方法，特别涉及一种快速提取荞麦叶片基因组DNA的方法。

背景技术

荞麦为蓼科，荞麦属的双子叶植物，在我国已有2700年的种植历史，作为小宗农作物，荞麦具有抗旱耐贫瘠、适播期时间范围宽、生长期短、药食同源等特点。目前国际上已经利用基因组学等现代生物技术开展荞麦育种工作。荞麦基因组学主要涉及到荞麦的丰产、抗逆、抗病虫等重要农艺性状挖掘及分子机理的研究。对于荞麦分子机理和基因功能的研究，快速高质量的提取DNA是重要基础和前提。但是目前还没有专门进行荞麦叶片基因组DNA的方法研究，因此针对荞麦专门研究快速、简便的提取其DNA方法具有重要意义。

目前荞麦DNA的主要提取方法还是借鉴传统的CTAB法，这种方法能够提取纯度较高的DNA样品，但是由于步骤繁琐，需要的时间较长，一般需要2个小时以上，且成本较高，并不适合进行高通量研究。因此，开发一种简单、方便、能够快速提取荞麦叶片基因组DNA的方法对于研究荞麦重要农艺性状的基因及其功能具有重要作用。

发明内容

发明目的：本发明目的是提供一种快速提取荞麦叶片基因组DNA的方法。

技术方案：本发明提供一种快速提取荞麦叶片基因组DNA的方法，包括如下步骤：

(1)将荞麦叶片和玻璃珠装入离心管中，将离心管放入泡沫箱中；

(2)在泡沫箱中倒入液氮，覆盖所有离心管，将泡沫箱密封后摇晃，使内部叶片粉末化；

(3)向离心管中加入提取液，使提取液和叶片粉末完全混合、温浴，后加入等体积的酚氯仿异戊醇，混匀后离心，所述提取液成分包括：乙二胺四乙酸(EDTA)、十二烷基磺酸钠(SDS)、氯化钠(NaCl)和三羟甲基氨基甲烷(Tris)；

(4)离心后取上清于新的离心管中，加入等体积的预冷异丙醇，混匀、冷浴；

(5)将上述混匀液离心，弃上清；

(6)加入乙醇清洗，离心后弃上清液；

(7)向离心管中加ddH₂O溶解，即为荞麦基因组DNA。

进一步地，所述步骤(1)中先将提取液预热。

进一步地，所述步骤(2)中泡沫箱密封后进行上下颠倒和左右摇晃。

进一步地，所述步骤(2)中当泡沫箱中的离心管高度达到泡沫箱深度一半时，倒入液氮。

进一步地，所述步骤(6)中乙醇浓度为70％。

有益效果：本发明所需时间短、提取步骤简单，可在约30分钟～1小时内提取大量荞麦叶片基因组DNA，比传统CTAB法缩短时间50％以上。该方法所用设备试剂价格低廉，无需专门磨样机，比传统的CTAB法试剂节省50％的成本，更适合高通量基因组DNA的提取，适合当前分子标记辅助育种的高通量筛选。

附图说明

图1为荞麦叶片基因组DNA的提取结果图，其中ddH₂O作为空白对照。