[发明专利]用于治疗肠癌的双特异性融合蛋白抗体及其应用

说明书

本发明公开了用于治疗肠癌的双特异性融合蛋白抗体及其应用。本发明双特异性融合蛋白抗体一条链为肠癌特异性抗原GUCY2C抗体，可与肠癌细胞特异性结合，其另一条链是ULBP2(NKG2D配体)，可与NKs表面NKG2D活化受体结合。本发明的有益效果主要体现在：本发明对于肠癌双特异性抗体的研发，将极大的丰富晚期难治性肠癌的内科治疗手段，并可能极大的降低药物副反应和治疗的精准性；本发明双特异性融合蛋白抗体，可将NK活化并定位至肿瘤细胞，使得NK的肿瘤杀伤效率极大的提高，丰富了难治性肠癌的治疗手段。

(一)技术领域

本发明涉及用于治疗肠癌的双特异性融合蛋白抗体及其应用。

(二)背景技术

自然杀伤细胞(Natural Killer Cells，NK细胞)作为血液中的单个核细胞中的一种，是人体先天免疫的核心组成部分，分布于外周各淋巴器官及血液循环系统，其主要功能是参与机体先天性免疫应答；同时在免疫调节中也发挥重要的作用，它无需抗原的刺激与活化即可发挥细胞毒效应；NK细胞的靶细胞主要包括：肿瘤细胞、病毒感染细胞、某些自身组织衰老细胞和细菌、寄生虫等，因此，NK细胞是机体抗肿瘤、抗感染的重要免疫因素；此外，NK细胞还参与第Ⅱ型超敏反应和抑制物抗宿主反应。

目前对NK细胞功能成熟和细胞毒活性的研究主要从它对NK细胞表面功能性受体的改变和NK细胞分泌效应因子的能力等方面来观察；IL-21可以明显地刺激NK细胞表面或滑行受体NKG2D分子的表达上调，从而激活NK细胞，协同低剂量IL-2显著地增强细胞增殖速率及毒活性。

4-1BB(CD137)是神经生长因子受体/肿瘤坏死因子受体家族成员之一，通过胞浆末尾区的聚集，与肿瘤坏死因子受体相关因子2(TRAF2)交流，依次活化ASK-1、JNK/SAPK或p38 MAP，启动级联放大效应，促进NK等免疫细胞活化、增殖、分化，调高杀伤肿瘤的活性。

双特异抗体是含有两种或多种特异性抗原结合位点的人工抗体，能在靶细胞和功能分子或细胞之间架起桥梁，激发具有导向性的免疫反应，在肿瘤等疾病治疗中表现出潜在价值。美国安进公司的新型靶向CD19和CD3的双特异性抗体Blincyto的上市，是对双特异性抗体产业的一个极大的鼓舞，该药被批准用于费城染色体阴性的复发或耐药急性淋巴母细胞性白血病的二线治疗，技术上归属于系列合成单抗，即T细胞双特异性单抗家族(BiTEs)。

双特异IgG抗体产生中的主要挑战就是轻、重链的正确连接，而以往最原始的方式是轻、重链随机合成非对称的异源二聚体IgG抗体，容易产生多种不需要的副产品；Knobs-into-holes(KiH)方法的使用解决了重链异二聚体的正确连结，但双抗轻链的正确连结仍未得到有效解决；此时，CrossMAb技术应运而生了！该技术基于双特异IgG抗体Fab臂功能域的交换而达成目的，解决了轻链连接的问题，而重链的正确结可利用KiH、静电转向技术达成。

实践证明CrossMAb已经成了具有广泛用途的抗体工程技术之一，可用于多种形式双特异抗体的构建，多项临床研究成功验证了该方法的可靠性，有4种独特设计的双特异抗体已经进入了I/II期临床试验，其中CEA TCB就是运用靶向肠癌特异性CEA抗原以及连接CD3抗体，来吸引更多淋巴毒T细胞靶向肠癌进行针对性的杀伤，临床试验已提示该双抗与PDL1单抗联合使用可显著提高难治性肠癌的疗效。

(三)发明内容

本发明目的是提供一种可将NK活化并定位至肿瘤细胞，使得NK的肿瘤杀伤效率极大的提高的双特异性融合蛋白抗体，及其在制备治疗肠癌的药物中的应用。

本发明采用的技术方案是：

一种用于治疗肠癌的双特异性融合蛋白抗体，其一条链为肠癌特异性抗原GUCY2C抗体，另一条链为ULBP2。