[发明专利]一种HLB固相萃取-高效液相色谱分析水环境中三种四环素类抗生素的方法

权利要求书

1.一种HLB固相萃取-高效液相色谱分析水环境中三种四环素类抗生素的方法，其特征在于，具体步骤如下：

1）绘制工作曲线：将土霉素标准品、四环素标准品、金霉素标准品用甲醇溶解配置成浓度为1.00μg/ml的混合标准溶液，将混合标准溶液逐级稀释成浓度为0.05、0.10、0.40、0.60、1.00μg/ml，用高效液相色谱仪串联紫外检测器检测，以峰面积为纵坐标、抗生素含量为横坐标，绘制出三种四环素类抗生素的工作曲线；

2）前处理过程：对采集的水样中三种四环素类抗生素使用HLB固相萃取小柱进行固相萃取；提取的溶液经平行定量浓缩仪浓缩定量；

3）将步骤2）浓缩定量的三种四环素类抗生素用高效液相色谱串联紫外检测器检测分析。

2.根据权利要求1所述的一种HLB固相萃取-高效液相色谱分析水环境中三种四环素类抗生素的方法，其特征在于：所述步骤2）中，前处理过程如下：水样经0.45μm滤膜过滤，待萃取；HLB固相萃取小柱先用5ml甲醇、5ml去离子水活化；再将50ml待萃取溶液转移至柱中，待液面降至柱床时，用5ml去离子水淋洗柱子，弃去流出液，用5ml甲醇洗脱并收集萃取液至试管中；将提取液在40℃下氮气吹干，准确吸取1ml甲醇复溶0.5min，过滤微孔滤膜后供液相色谱检测。

3.根据权利要求2所述的一种HLB固相萃取-高效液相色谱分析水环境中三种四环素类抗生素的方法，其特征在于：在所述的步骤3中，使用外标法定量测定水环境中三种四环素类抗生素的含量。

4.根据权利要求2所述的一种HLB固相萃取-高效液相色谱分析水环境中三种四环素类抗生素的方法，其特征在于：所使用的的固相萃取小柱为南京亘闪科技有限公司提供的HLB小柱，60mg，3ml。

5.根据权利要求1所述的一种HLB固相萃取-高效液相色谱分析水环境中三种四环素类抗生素的方法，其特征在于，所述步骤3）中高效液相色谱分析条件为：紫外检测器检测波长：335nm，柱温：25℃，流速：1.0mL·min^-1；进样量：10μL；流动相：0.01mol·L^-1的草酸水溶液、乙腈和甲醇（比例为77:18:5）。

6.根据权利要求1所述的一种HLB固相萃取-高效液相色谱分析水环境中三种四环素类抗生素的方法，其特征在于：所述步骤3）中，高效液色谱洗脱条件：等度洗脱。