[发明专利]一种DNA编码化合物库的活细胞膜蛋白筛选方法

权利要求书

1.一种DNA编码化合物库的活细胞膜蛋白筛选方法，包括以下步骤：

a.将外源基因过表达至活细胞；

b.细胞培养，检测靶标蛋白在细胞膜上的表达量；

c.用筛选平衡液处理细胞后，将DNA编码化合物库与细胞孵育，然后清洗、解离。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤a中所述外源基因为质粒或病毒。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤a中所述过表达的方法为稳定转染或瞬时转染。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：转染方法包括聚乙烯亚胺转染法、阳离子脂质体转染法、磷酸钙转染法、纳米颗粒转染、电穿孔转染法、病毒转染法以及其它能够将外源基因转运至活细胞内的方法。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述聚乙烯亚胺转染法为：将10～100μg质粒、50～200μg聚乙烯亚胺加入到1～4×10⁷的活细胞中，并孵育2～6小时。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤b中细胞培养使用的培养基含有F-68、L-谷氨酰胺和青链霉素。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤b中利用靶标蛋白对应的阳性小肽配体通过流式检测靶标蛋白在细胞膜上的表达量。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤b中细胞培养后，细胞膜上靶标蛋白的表达量达到平均每个细胞上10000至25000个。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤c中筛选平衡液和孵育的缓冲液含有鲑鱼精DNA。

10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤c中DNA编码化合物库中DNA编码化合物的总数量为2×10¹⁵～2×10¹⁶个，细胞总数量为2×10⁷～10⁸个。

11.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤c中孵育的时间为0.5～4小时，孵育的温度为4～30℃。

12.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤c中清洗为使用缓冲液清洗细胞2～5次。

13.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤c中解离为加热至90～100℃并维持10～30分钟，10000～15000rpm下离心将细胞碎片沉淀分离。

14.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：在步骤c之后，取步骤c得到的上清液，通过qPCR定量DNA编码化合物数量，如果数量大于10⁸，则将步骤c中的DNA编码化合物库替换为该上清，并重复步骤a到c，直到qPCR定量DNA编码化合物总数量为10⁶～10⁷。