[发明专利]一种亚临界水提取菌丝体中那西肽的方法

说明书

本发明涉及一种亚临界水提取菌丝体中那西肽的方法，该方法是：将发酵液进行过滤，得到菌丝体；所述菌丝体在6MPa、125~135℃、固液比为1 g：20~30mL的条件下，采用亚临界水进行萃取，25~45min后经过滤得到固体，该固体依次经洗涤、烘干，即得那西肽粗品。本发明首次将亚临界水技术应用于微生物次级代谢产物的提取，用亚临界水代替二氯甲烷作为萃取剂提取那西肽，不但经济环保，减少了三废排放，而且提取时间短。采用本发明方法后，菌丝体中的提取率达到93%以上。

技术领域

本发明涉及微生物发酵领域，尤其涉及一种亚临界水提取菌丝体中那西肽的方法。

背景技术

发酵液（fermentation broth），指的是液体培养基接入微生物菌种，经过一段时间培养后，微生物利用培养基中的营养成分， 合成菌体及分泌产物，这种经微生物代谢后的液体叫发酵液。1961年法国科学家在Streptomyces actuosus 40037发酵液中发现了那西肽。

那西肽是一类富含硫元素并含有多个噻唑环的多肽类抗生素，是一种非吸收性的饲料添加剂，其作用是抑制肠道中的革兰氏阳性菌的生长。通过肠道给药，那西肽具有动物体内不残留、抑菌范围广、用量少等特点，并可以明显的促进猪、鸡等动物生长。

那西肽较难溶于水，可溶于氯仿、吡啶、二甲基亚砜、二甲基甲酰胺，微溶于甲醇、乙醇、乙酸乙酯和苯，不溶于石油醚。目前，各溶剂提取那西肽的效率：氯仿＞二氯甲烷＞二氯乙烷＞甲基叔丁基醚＞甲苯，因氯仿不稳定，工业上选择二氯甲烷提取。

由于经过发酵那西肽在菌丝体中的含量占总量的66%，有机溶剂的提取在工业生产中会增加安全风险并且污染环境，并且提取时间长，因此对那西肽从菌丝体中的提取进行研究，对于解决工业化生产中的由有机溶剂引起的安全问题和环境问题有重要的作用，也有很重要的经济价值和实用性。

亚临界水是温度在100℃~374℃之间，一定压力下，仍然保持液体状态的水。通常条件下，水是极性化合物，但随着水温升高，亚临界水的物理化学性质会随之改变，尤其是介电常数和离子积。目前，亚临界水技术应用于植物有效成分的提取较多，但将这项技术应用于微生物菌丝体中次级代谢产物的提取尚属空白。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种经济环保的亚临界水提取菌丝体中那西肽的方法。

为解决上述问题，本发明所述的一种亚临界水提取菌丝体中那西肽的方法，其特征在于：将发酵液进行过滤，得到菌丝体；所述菌丝体在6MPa、125~135℃、固液比为1 g：20~30mL的条件下，采用亚临界水进行萃取，25~45min后经过滤得到固体，该固体依次经洗涤、烘干，即得那西肽粗品。

所述烘干条件是指温度为80℃，时间为1h。

本发明与现有技术相比具有以下优点：

1、本发明首次将亚临界水技术应用于微生物次级代谢产物的提取，用亚临界水代替二氯甲烷作为萃取剂提取那西肽，不但经济环保，减少了三废排放，而且提取时间短。

2、本发明在萃取过滤后使用母液亚临界水进行洗涤，实现了水的多次循环利用。

3、本发明将菌丝体在125~135℃进行亚临界水提取，菌丝体中的提取率达到93%以上（参见表1）。

表1 温度对提取率的影响

由于工业生产中的普通溶剂萃取率为93%，所以选取了提取率大于其值的范围为本方法提取的温度条件。由于压强对亚临界水的极性的影响不大，一般的压力均为6MPa。

具体实施方式