[发明专利]一种快速、高灵敏性检测和定量酸奶中动物双歧杆菌BB-12的方法

说明书

本发明涉及一种TaqMan‑MGB探针，所述探针为SEQ NO.2、SEQ NO.3、SEQ NO.4。本发明所设计的TaqMan‑MGB探针灵敏度高、特异性好、检测所用时间较中华人民共和国国家标准(GB 4789.35‑2016)更短，因TaqMan‑MGB探针是在基因领域对细菌个数进行检测，因此与中华人民共和国国家标准(GB 4789.35‑2016)相比不受外在环境及人为认知的影响，检测效果更精确，灵敏度更高。

技术领域

本发明属于农业食品检测技术领域，尤其是一种快速、高灵敏性检测和定量酸奶中动物双歧杆菌BB-12的方法。

背景技术

动物双歧杆菌乳双歧亚种(动物双歧杆菌BB-12)是世界上临床研究最为充分的双歧杆菌菌株，其保健作用已经在胃肠健康和免疫功能的许多临床研究中得到了验证。目前已有大量的体外实验确定了动物双歧杆菌BB-12的菌株特点和机理。在体内，动物双歧杆菌BB-12表现出了极好的酸胆汁耐受性，它含有胆盐水解酶，并具有很强的粘附性、病原菌抑制性、免疫屏障功能增强性。对于包括足月新生儿在内的健康人群，动物双歧杆菌BB-12作为食品中的膳食成分和膳食补充剂可认为是安全的。有研究表明该菌对婴幼儿有促进肠道菌群平衡、提高抵抗力、降低特应性湿疹的症状及预防湿疹等过敏性疾病、降低呼吸道感染率、促进生长发育、促进婴儿免疫系统成熟、预防腹泻及减少腹泻的发病率、减少便秘发生率、防止轮状病毒感染、降低坏死性小肠结肠炎发生率、降低早期急性中耳炎及复发性呼吸道感染的风险、影响体重、益于牙齿健康等作用。对孕妇具有降低妊娠糖尿病的患病风险、有助胎儿健康、降低小儿特应性皮炎发生率、降低妊娠并发症相关炎因子、预防或控制肥胖、调节葡萄糖水平等作用。对普通人群有助于肠道健康、调节免疫、降低唾液中变形链球菌水平及有助于口腔健康、促进抗生素治疗后有益菌的再次定植等作用。

实时荧光定量PCR技术通过荧光信号分子的不断累积而实现对PCR反应全程进行实时监测，利用已知标准品得到标准曲线再对待测样品进行检测分析。每个模板的起始拷贝数对数与其Ct值存在线性关系，起始拷贝数越多则Ct值越小。使用荧光定量PCR仪检测已知标准品可得到标准曲线，只要获得待测样品的Ct值，即可通过标准曲线公式来计算出该样品的起始拷贝数得出结果。因实时荧光定量PCR与传统定量技术相比较，具有特异灵敏、重复性好、操作简便、定量准确，以及自动化程度较高和对样品的污染小等优点，基于实时荧光定量PCR检测的优越之处。

现有检测细菌数量的方法有：计数器测定法、平板菌落计数法、比浊法、测定细胞重量法和颜色改变单位法等。平板菌落计数法是根据每个活的细菌能长出一个菌落的原理设计的。此法是目前国际上许多国家所采用的方法，限用于形成菌落的微生物，广泛应用于水、牛奶、食物、药品等各种材料的细菌检验，是最常用的活菌计数法。与本发明相比，该方法易受温度、实验环境、人员操作等的影响，平板菌落计数法耗时较长，一般需要3-4天才能得出结果。除此之外，计数器测定法即用血细胞计数器进行计数，该方法操作简便，可立即对纯菌液的细菌个数测定得出结果；电子计数器计数法，该法测定结果较准确，但它只识别颗粒大小，而不能区分是否为细菌；比浊法是根据菌悬液的透光量间接地测定细菌的数量，此法简便快捷，但只能检测含有大量细菌的悬浮液，得出相对的细菌数目，对颜色太深的样品，不能用此法测定；测定细胞重量法，此法适于菌体浓度较高的样品；颜色改变单位法，这种方法通常用于很小的且用一般的比浊法无法计数的微生物，比如支原体等，它是以微生物在培养基中的代谢活力为指标来计数微生物的相对含量的。

与本发明相比，上述方法的检测更多的针对菌液，无法应用到酸奶制品中进行细菌计数的测定，因酸奶中含有大量蛋白质和脂质物质，会极大影响上述方法测定结果的准确性。

通过检索，尚未发现与本发明专利申请相关的专利公开文献。

发明内容

本发明的目的在于鉴于目前动物双歧杆菌BB-12对人体的健康作用以及所拥有的经济效益和前景，克服现有技术的不足之处，提供一种快速、高灵敏性检测和定量酸奶中动物双歧杆菌BB-12的方法。