[发明专利]一种外用制剂中载荷小干扰RNA脂质体的检测方法

说明书

本发明涉及生物制剂检测领域，具体涉及一种外用制剂中载荷小干扰RNA脂质体的检测方法。本发明利用不同染料对小干扰RNA自组装状态的影响差异，结合离心、稀释方法减少化妆品的颜色干扰，设计了一套简单快捷的检测化妆品或皮肤外用剂型中小干扰RNA与脂质体的结合状态的方法，本发明提供的载荷小干扰RNA脂质体的检测方法可以简单便捷、低成本检测化妆品或皮肤外用剂型中的是否含有载荷小干扰RNA脂质体，并且可以检测化妆品或皮肤外用剂型中小干扰RNA与脂质体的结合状态，具有灵敏度高，简单廉价的特点，具有很好地实用价值，对含有小干扰RNA脂质体化妆品或皮肤外用剂型的推广提供有力的技术支持。

技术领域

本发明涉及生物制剂检测技术领域，尤其是一种外用制剂中载荷小干扰RNA脂质体的检测方法。

背景技术

小干扰RNA(Small interfering RNA，siRNA)是一种小双链RNA分子，约含有20～25个碱基，能够与核酸内切酶、核酸外切酶、解旋酶等构成RNA诱导的沉默复合体(RNA-induced silencing complex，RISC)，引发由双链RNA启动的序列特异的转录后基因沉默现象。小干扰RNA的主要特征是能够下调或关闭特定基因的表达，具有特异性强和效率高的特点，可沉默某些可引发疾病的基因。现已成为治疗许多疾病的潜在药物，也少量应用在化妆品或皮肤外用剂型中。荷载小干扰RNA的脂质体纳米粒药物递送系统，是阳离子脂质体或壳聚糖修饰的阳离子脂质体在水溶液中与化学合成的小干扰RNA自组装形成的带正电荷的纳米粒。在化妆品或皮肤外用剂型中添加载荷小干扰RNA脂质体，属于全新的技术领域，因此化妆品或皮肤外用剂型中载荷小干扰RNA的检测，以及化妆品或皮肤外用剂型中小干扰RNA与脂质体的结合状态的检测成为仍为亟待解决的难题。

目前针对siRNA的检测方法主要包括凝胶电泳法、PCR定量法、侵入检测和ELISA定量检测法。凝胶电泳法一般用于已知条带大小的纯品siRNA的检测，通过染料对siRNA染色，但化妆品或皮肤外用剂型中添加小干扰RNA脂质体时，由于小干扰RNA添加量少，由于小干扰RNA含量低，以及化妆品的颜色干扰，使得现有的凝胶电泳法该方法灵敏度低，荧光难以识别，并且难以区分化妆品中小干扰RNA与脂质体的结合状态。

荷载小干扰RNA脂质体，是阳离子脂质体或壳聚糖修饰的阳离子脂质体在水溶液中与化学合成的小干扰RNA自组装形成的带正电荷的纳米粒。在化妆品或皮肤外用剂型中添加载荷小干扰RNA脂质体，属于全新的技术领域，因此化妆品或皮肤外用剂型中载荷小干扰RNA的检测，以及化妆品或皮肤外用剂型中小干扰RNA与脂质体的结合状态的检测成为仍为亟待解决的难题。

目前针对siRNA的检测方法主要包括凝胶电泳法、PCR定量法、侵入检测和ELISA定量检测法。凝胶电泳法一般用于已知条带大小的纯品siRNA的检测，通过染料对siRNA染色，但化妆品或皮肤外用剂型中添加小干扰RNA脂质体时，由于小干扰RNA添加量少，小干扰RNA含量低，以及化妆品的颜色干扰，使得现有的凝胶电泳法方法灵敏度低，荧光难以识别，并且难以区分化妆品中小干扰RNA与脂质体的结合状态。

发明内容

本发明要解决的技术问题是：为了解决上述背景技术中存在的问题，提供一种改进的外用制剂中载荷小干扰RNA脂质体的检测方法，解决的上述背景技术中存在的问题。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种外用制剂中载荷小干扰RNA脂质体的检测方法，包含以下步骤：

(1)将待测外用制剂与DEPC无菌水混合，离心后取下层清液；

(2)使用染料R、NEB#B7024紫色凝胶上样染料分别对步骤(1)中的下层清液染色；

(3)染色后进行琼脂糖凝胶电泳，以小干扰RNA作为对照组，根据条带情况判断是否含有载荷小干扰RNA脂质体及小干扰RNA的包封状态。

进一步地，为了配合混合，步骤(1)中所述的外用制剂与DEPC无菌水的混合比例关系为1:1至1：5。