[发明专利]一种2019-nCoV的IgG、IgM和IgA抗体联合检测试剂盒及其检测方法

权利要求书

1.一种2019-nCoV的IgG、IgM和IgA抗体联合检测试剂盒进行2019-nCoV抗体的非诊断目的的检测方法，其特征在于：所述试剂盒包括2019-nCoV标志蛋白包被板、样品稀释液、洗涤液、抗人IgA抗体酶标工作液、抗人IgG抗体酶标工作液、抗人IgM抗体酶标工作液、显色底物、终止液和阳性对照；

所述阳性对照为抗2019-nCoV标志蛋白的单克隆抗体IgG-人IgA/IgG/IgM抗体的复合物；所述阳性对照的制备方法为：向人IgA、人IgG和人IgM中分别加入1mg/mL的sulfo-SMCC，其中人IgA、人IgG和人IgM与1mg/mL的sulfo-SMCC的质量比均为1000:20-30，于24-28℃反应25-35min，反应产物分别在PBS中透析过夜，得到活化的人IgA、人IgG和人IgM，将所述活化的人IgA、人IgG和人IgM按照1.5-2.5:1:3.5-4.5的质量比混合均匀，作为激活抗体；

向重组兔抗2019-nCoV标志蛋白单克隆抗体中加入0.03mg/mL的Traut'sReagent，其中重组兔抗2019-nCoV标志蛋白单克隆抗体与0.03mg/mL的Traut's Reagent的质量比为1000:1-2，于24-28℃反应25-35min，加入激活抗体，得到抗2019-nCoV标志蛋白的单克隆抗体IgG-人IgA/IgG/IgM抗体的复合物，将所述抗2019-nCoV标志蛋白的单克隆抗体IgG-人IgA/IgG/IgM抗体的复合物稀释至0.4-0.6μg/mL得到阳性对照；

所述的试剂盒进行2019-nCoV抗体的非诊断目的的检测方法，包括以下步骤：

S1、一抗孵育：将待测血清与所述样品稀释液按1:100的体积混合，得到稀释样品，将所述稀释样品加入到所述2019-nCoV标志蛋白包被板的孔中，同时设置阴性对照和阳性对照，封板，37℃孵育25-35min；

S2、第一次洗板：弃去经一抗孵育后的所述2019-nCoV标志蛋白包被板的孔中液体，将洗涤液稀释10倍后洗板3-4次；

S3、酶标孵育：向经第一次洗板后的所述2019-nCoV标志蛋白包被板的孔中分别加入所述抗人IgA抗体酶标工作液、所述抗人IgG抗体酶标工作液和所述抗人IgM抗体酶标工作液，封板，37℃孵育反应25-35min；

S4、第二次洗板：弃去经酶标孵育后的所述2019-nCoV标志蛋白包被板的孔中液体，将洗涤液稀释10倍后洗板3-4次；

S5、显色：向经第二次洗板后的所述2019-nCoV标志蛋白包被板的孔中加入所述显色底物，封板，孵育反应10-20min；

S6、终止显色：向经显色后的所述2019-nCoV标志蛋白包被板的孔中加入所述终止液，终止显色反应；

S7、测OD值：用酶标仪分别读取经终止显色后的所述2019-nCoV标志蛋白包被板的孔中液体在波长为450nm-630nm的OD值；

S8、若所述稀释样品的OD值/相应的抗体临界值CO≥1，则检测结果为阳性，否则为阴性；其中，IgA抗体的临界值CO＝阴性对照OD值+0.18×阳性对照OD值；IgG抗体的临界值CO＝阴性对照OD值+0.13×阳性对照OD值；IgM抗体的临界值CO＝阴性对照OD值+0.21×阳性对照OD值。

2.如权利要求1所述的试剂盒进行2019-nCoV抗体的非诊断目的的检测方法，其特征在于：所述2019-nCoV蛋白包被板的制备方法具体包括以下步骤：

a、抗原蛋白包被：将2019-nCoV标志蛋白用包被液稀释至1-2μg/mL，加入到聚苯乙烯96孔板中，封板，37℃包被1.5-2.5h；

b、洗板：甩掉经2019-nCoV标志蛋白包被的所述96孔板中多余的液体，用清洗液洗涤3-4次；

c、封闭：用封闭液封闭经洗板后的所述96孔板，封板，37℃封闭2-3h；

d、干燥：甩掉经封闭后的所述96孔板中的所述封闭液，干燥后得到所述2019-nCoV标志蛋白包被板。