[发明专利]一种微小核糖核酸miR-34a偶联探针及其制备方法

权利要求书

1.一种微小核糖核酸miR-34a偶联探针，其特征在于，具体结构如下：

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其中，位于结构式左侧的AS1411为核酸适配体且序列为5’- GGTGGTGGTGGTTGTGGTGGTGGTGGTTTTTTTTTT-3’，可靶向结合肿瘤细胞表面高表达的核仁素；位于结构式右侧的miR-34a为合成miRNA且序列为5’-UGGCAGUGU-CUUAGCUGGUUGU-3’/5’-CAAUCAGCAAGUAUACUGCCC-U-3’，可靶向肿瘤细胞内多种致癌基因；位于结构式中部的中间连接化学基团为肿瘤细胞内还原性微环境响应的二硫键。

2.如权利要求1所述的一种微小核糖核酸miR-34a偶联探针制备方法，其特征在于，具体通过如下化学反应及步骤制备得到：

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步骤S1：首先将3-3’二硫代二丙酸进行溶解，并向其中加入二环己基碳二亚胺（DCC）及N-羟基琥珀酰亚胺（NHS），所添加的配比分别是溶解液的2.2倍当量的二环己基碳二亚胺（DCC）及溶解液的2.2倍当量的N-羟基琥珀酰亚胺（NHS），室温反应后进行过滤，蒸干溶剂得到中间产物；

步骤S2：将所述步骤S1得到的中间产物溶解在二甲基亚砜（DMSO）中，并向其中加入3’-氨基修饰miR-34a、3’-氨基修饰AS1411以及N,N'-异丙基乙胺（DIPEA），上述加入的各反应物重量配比分别为所述中间产物溶解液1倍当量的3’-氨基修饰miR-34a、1倍当量的3’-氨基修饰AS1411以及3倍当量的N,N'-二异丙基乙胺（DIPEA）；

步骤S3：所述步骤S2充分混合反应得到反应物混合液，最后通过高效液相色谱分离得到miR-34a偶联探针。

3.根据权利要求2所述的一种微小核糖核酸miR-34a偶联探针制备方法，其特征在于：所述步骤S1的3-3’二硫代二丙酸是采用二氯甲烷溶解剂进行溶解处理。

4.根据权利要求2所述的一种微小核糖核酸miR-34a偶联探针制备方法，其特征在于：所述步骤S1的室温反应时间设定为不少于1小时。

5.根据权利要求2所述的一种微小核糖核酸miR-34a偶联探针制备方法，其特征在于：所述步骤S3中混合反应的温度采用的37℃。