[发明专利]一种测定O-连接N-乙酰氨基葡萄糖转移酶活性的方法及该方法的应用

权利要求书

1.一种测定O-连接N-乙酰氨基葡萄糖转移酶活性的方法，其特征在于，首先利用O-连接N-乙酰氨基葡萄糖转移酶将叠氮修饰的O-连接N-乙酰氨基葡萄糖的糖基供体连接到荧光基团修饰的O-连接N-乙酰氨基葡萄糖的糖受体上，再通过点击反应将糖受体连接到二苯并环辛炔修饰的大分子牛血清白蛋白上，最后根据荧光偏振信号的强弱判断O-连接N-乙酰氨基葡萄糖转移酶活性的大小。

2.根据权利要求1所述的一种测定O-连接N-乙酰氨基葡萄糖转移酶活性的方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、配置OGT酶反应体系：包括FAM-CKII肽段、UDP-GlcNAcN₃、ncOGT酶蛋白和缓冲液。

S2、将步骤S1的反应体系避光孵育一段时间后，终止反应；

S3、将牛血清白蛋白与二苯并环辛炔-活性脂混合，孵育一段时间后生成DBCO-BSA复合物；

S4、将步骤S2终止反应后的酶反应体系用磷酸盐缓冲液稀释至合适的浓度，加入步骤S3的DBCO-BSA复合物进行点击反应；

S5、点击反应结束后，用酶标仪检测荧光偏振信号，并读取荧光偏振信号值。

3.根据权利要求2所述的一种测定O-连接N-乙酰氨基葡萄糖转移酶活性的方法，其特征在于，所述FAM-CKII肽段具有如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。

4.根据权利要求2所述的一种测定O-连接N-乙酰氨基葡萄糖转移酶活性的方法，其特征在于，所述缓冲液包括NaCl、Tris-HCl、MgCl₂和EDTA，pH为7.4。

5.根据权利要求2所述的一种测定O-连接N-乙酰氨基葡萄糖转移酶活性的方法，其特征在于，步骤S3所述牛血清白蛋白与二苯并环辛炔-活性脂的混合摩尔浓度比为1:1～1:20。

6.根据权利要求2所述的一种测定O-连接N-乙酰氨基葡萄糖转移酶活性的方法，其特征在于，用酶标仪检测荧光偏振信号时，设定激发波长为485nm，发射波长为535nm。

7.一种根据权利要求1-6任一项所述的方法配制的O-连接N-乙酰氨基葡萄糖转移酶活性测定用试剂盒，其特征在于，包括FAM-CKII肽段、UDP-GlcNAcN₃、牛血清白蛋白、二苯并环辛炔-活性脂和缓冲液。

8.权利要求1-6任一项所述的方法在O-连接N-乙酰氨基葡萄糖转移酶抑制剂筛选中的应用，其特征在于，所述O-连接N-乙酰氨基葡萄糖转移酶抑制剂的筛选包括但不限于O-连接N-乙酰氨基葡萄糖转移酶抑制剂的高通量筛选。

9.权利要求1-6任一项所述的方法在O-连接N-乙酰氨基葡萄糖转移酶抑制剂抑制活性测定中的应用。

10.一种根据权利要求1-6任一项所述的方法配制的O-连接N-乙酰氨基葡萄糖转移酶抑制剂筛选用试剂盒，其特征在于，包括FAM-CKII肽段、UDP-GlcNAcN₃、ncOGT酶蛋白、牛血清白蛋白、二苯并环辛炔-活性脂和缓冲液。