[发明专利]新冠状病毒检测用多位点重组抗原及其制备方法

说明书

本发明涉及一种新冠状病毒检测用多位点重组抗原及其制备方法，通过蛋白序列比对的方法挑选出S，N，E，M4种蛋白的具有极强的抗原决定基，是重要的免疫激活感染体产生抗体的重要蛋白片段，感染体会优先释放相应的抗体，同时利用GSSSG链接肽链形成了拥有多位点的具有免疫原性特异性强的抗原蛋白，该重组蛋白区别于其他单一蛋白序列，融合了新冠状病毒的4种基础蛋白的的片段，串联在了一起，该重组抗原可以特异性的识别只有新冠病毒感染的血清种的抗体，同时由于拥有4个不同蛋白的片段，极大的提高其灵敏度和特异性，是检测新冠病毒抗体的最佳候选抗原。

技术领域

本发明属于抗原制备领域，具体涉及一种新冠状病毒检测用多位点重组抗原及其制备方法。

背景技术

新型冠状病毒属于β属的冠状病毒，单链正义RNA病毒，有包膜，颗粒呈圆形或椭圆形，常为多形性，直径60-140nm，其基因特征与SARSr-CoV和 MERSr-CoV有一定的区别，表现出了一定的独特性，目前研究显示与蝙蝠SARS 样冠状病毒同源性达85％以上。因此其具有超高致病率和传播性，已经引起了世界卫生组织的高度重视，并成为全球公共卫生的重大威胁。

冠状病毒的独特外表主要体现在病毒包膜外，有类似的棒状的子粒结构，类似于欧洲中世纪的国王王冠的造型，因此得名冠状病毒。其中主要包括刺突糖蛋白(S蛋白)，核衣壳蛋白(N蛋白)，包膜糖蛋白(E蛋白)，膜蛋白(M 蛋白)以及核糖核酸组成。S蛋白是病毒表面包膜的棒-球形糖基化蛋白，形成了特有的冠状形态，也是冠状病毒侵袭宿主细胞的主要媒介，通过与人类细胞表面AEC2蛋白相结合，协助新冠病毒入侵到细胞并造成破坏。NP蛋白病毒核内唯一的蛋白，是病毒表达量最多的蛋白，可以与病毒RNA相结合，识别基因组的包膜信号将包膜蛋白打包成病毒颗粒，也是冠状病毒最重要的抗原之一。

但是目前尚未有适合检测新冠病毒抗体的候选抗原。

发明内容

为解决现有技术中存在的问题，本发明提供一种新冠状病毒检测用多位点重组抗原，其特征在于，所述新冠状病毒检测用多位点重组抗原的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

本发明还提供了一种新冠状病毒检测用多位点重组抗原，其制备方法如下：

(1)：通过蛋白序列比对的方法挑选出S，N，E，M四种蛋白的具有极强的抗原决定基并采用基因克隆技术合成新冠状病毒检测用多位点基因片段；

(2)：将合成的新冠状病毒检测用多位点基因片段转入pGEX-4T-2质粒载体中再导入BL21(D3)菌株中；

(3)：利用IPTG为诱导剂，促使细菌大量表达目标蛋白，再经过GSH树脂进行纯化即得所述新冠状病毒检测用多位点重组抗原。

在上述任一方案中优选的是，所述新冠状病毒检测用多位点基因片段的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

在上述任一方案中优选的是，所述pGEX-4T-2质粒载体的氨基酸序列如SEQ IDNO.3所示。