[发明专利]一株高效转化甜菊苷为甜茶苷的菌株及其培养方法与应用

权利要求书

1.一种金黄杆菌 (Chryseobacteriumsp.) 1433在制备甜茶苷中的应用；

所述金黄杆菌 (Chryseobacteriumsp.) 1433，2020年7月6日保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号CGMCC No.20188，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所；

所述金黄杆菌 (Chryseobacteriumsp.) 1433的16S rDNA基因序列如SEQ ID NO.1所示。

2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的金黄杆菌 (Chryseobacteriumsp.)1433的培养方法，包括步骤如下：

将金黄杆菌(Chryseobacteriumsp.)1433划线接种到固体培养基上，在25~35℃下培养24~48 h，活化菌株；将活化完成的菌株接种到液体培养基中，在25~35℃，250~350 rpm的条件下，培养24~48 h，制备种子液；将种子液按照1.5~2.5%的体积比转接于液体培养基中，在25~35℃，250~350 rpm的条件下，培养24~48 h，得到菌液。

3.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的固体培养基为YPD固体培养基；所述YPD固体培养基的成分为：1%酵母膏，2%蛋白胨，2%葡萄糖，2%琼脂糖，均为质量百分比，pH7.0。

4.如权利要求2所述的应用，其特征在于，所述的液体培养基为YPD液体培养基或LB液体培养基；所述YPD液体培养基的成分为：1%酵母膏，2%蛋白胨，2%葡萄糖，均为质量百分比，pH 7.0；所述LB液体培养基的成分为：0.5%酵母膏，1%蛋白胨，1%氯化钠，均为质量百分比，pH 7.0。

5.如权利要求1所述的应用，其特征在于，包括步骤如下：配置重量体积比为0.1~50%的甜菊糖唯一碳源的M9改良培养基，接入重量体积比为10~50%的所述金黄杆菌(Chryseobacteriumsp.) 1433菌体，在15~30℃，200~400 rpm下，酶解1~48 h，酶解结束后以3000~12000 rpm离心去除菌体，上清液经吸附分离、洗脱结晶和纯化获得甜茶苷。

6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述的甜菊糖唯一碳源的M9改良培养基的配方为每升水：0.5 g NH₄Cl，3.0 g Na₂HPO₄，1.5 g KH₂PO₄，1 mM MgSO₄，15 g 甜菊苷， pH7.0。

7.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述金黄杆菌 (Chryseobacteriumsp.)1433对甜菊苷的转化率为100%，转化后得到的甜茶苷的收率为100%。

8.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述酶解的时间为1~24 h；所述的吸附分离、洗脱结晶和纯化的具体步骤为：使用HPD-T01树脂对上清液进行吸附，用70%乙醇进行洗脱，将洗脱液用旋转蒸发仪蒸干结晶获得纯化甜茶苷。