[发明专利]一种小而密低密度脂蛋白胆固醇酶法检测试剂盒

说明书

本发明公开了一种小而密低密度脂蛋白胆固醇酶法检测试剂盒，其包括试剂R1试剂、R2试剂和校准品，其中，试剂R1包括如下各组分及浓度：缓冲液、胆固醇脂酶、胆固醇氧化酶、过氧化氢酶、抗人高密度脂蛋白抗体、表面活性剂以及防腐剂；试剂R2包括如下各组分及浓度：缓冲液、表面活性剂、4‑氨基安替比林、过氧化物酶以及防腐剂；校准品包括如下各组分及浓度：缓冲液、甘油、稳定剂、sdLDL抗原以及防腐剂。本发明通过加入抗人高密度脂蛋白抗体，大大改善了试剂盒的性能，其可以使试剂稳定性更强，灵敏度更高，检测范围更广，检测成本降低。

技术领域

本发明涉及生物医药领域，具体涉及一种蛋白酶检测试剂盒，尤其涉及一种小而密低密度脂蛋白胆固醇酶法检测试剂盒。

背景技术

Lipoprint LDL亚组分快速分析系统是目前唯一由美国食品药品监督管理局认证的用于LDL亚组分分离检测的诊断设备。Lipoprint检测系统是根据LDL的颗粒大小和电荷的多少，通过聚丙烯酰胺凝胶电泳法来达到分离的目的，可在短时间内将LDL分成7个亚组分，其中组分1和2定义为ldLDL颗粒；组分3至7定义为sdLDL颗粒。该系统可高效地定量、定性检测LDL各亚组分，因而，更有利于在临床常规实验室中的普及应用。研究表明，在冠心病患者血浆中，代表sdLDL颗粒的LDL组分3的水平及其百分比显著高于对照者；在具有相近LDL水平的不同冠心病患者中，血浆LDL以组分3为主的患者，其预后较差，更易发生不良心血管事件。可见，对LDL亚组分水平的全面分析相较传统的单纯以LDL或LDL－C为检测目的的血脂分析，更能反映ASCVD患者体内致AS脂蛋白的真实水平，有望为临床ASCVD的危险评估提供更有价值的参考指标。

国外生物公司也推出了采用酶联免疫吸附试验竞争法检测人血清或血浆sdLDL的商品化试剂盒；该方法虽然有望实现sdLDL的快速检测，但是针对人sdLDL的特异性抗体并不能完全排除存在其他交叉反应的可能，且抗人sdLDL抗体的制备方法及其特异性位点仍需进一步验证，该法与其他传统sdLDL分离检测方法的相关性也需进一步评估；是否可应用于临床仍有待考证。

sdLDL－C的非匀相测定法主要包括肝素镁沉淀法和肝素锰沉淀法，原理是通过选择性沉淀lbLDL、中间密度脂蛋白和极低密度脂蛋白，收集含sdLDL和高密度脂蛋白的上清液，再测定上清液中LDL－C含量，从而实现对sdLDL－C的定量检测。该方法不需特殊仪器设备，较LDL亚组分传统检测方法简便；但存在预先沉淀处理容易产生不完全沉淀的缺点，易造成最终测定结果的不准确；且不适用于全自动生化分析仪，因此，研发一种完全自动化的sdLDL－C检测方法成为近年来LDL亚组分研究的热点之一。

sdLDL－C常规通过表面活性剂第一反应来进行改变LDL以外的(例如CM、VLDL以及HDL等)脂蛋白的结构,使诸如CM、VLDL以及HDL等的脂蛋白与酶起反应,LDL没有反应.而CM,VLDL,HDL等反应被促进,LDL以外的脂蛋白被消除,第二反应表面活性剂则促进各类脂蛋白的酶反应,与第一反应中没被消除LDL产生显色反应.此法所进行的利用表面活性剂在第一反应消除LDL以外的脂蛋白消除率只为30-40％。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种小而密低密度脂蛋白胆固醇酶法检测试剂盒及其制备方法。本发明通过加入抗人高密度脂蛋白抗体，尤其是在试剂R1中加入一对高密度脂蛋白单克隆抗体，从而实现特异性结合血清中高密度脂蛋白，进而大大改善了试剂盒的性能，使试剂稳定性更强，灵敏度更高，检测范围更广,检测成本降低.

为实现上述目的，本发明通过以下技术方案实现：

第一方面，本发明提出了一种小而密低密度脂蛋白胆固醇酶法检测试剂盒，其包括试剂R1试剂、R2试剂和校准品，其中，

试剂R1包括如下各组分及浓度：

试剂R2包括如下各组分及浓度：